24.03.04: ELISA CASPR1

ELISA CASPR1

Muestras:

  • Control negativo
  • Control positivo CASPR1
  • 24-2-405 à BOX 370
  • 24-2-406 à BOX 370
  • 24-2-407 à BOX 370
  • 24-2-408 à BOX 370
  • 24-2-409 à BOX 370
  • 24-2-410 à BOX 370
  • 24-2-411 à BOX 370
  • 24-2-412 à BOX 370
  • 24-2-413 à BOX 370
  • 24-2-414 à BOX 370
  • 24-2-415 à BOX 370
  • 24-2-416 à BOX 371
  • 24-2-417 à BOX 371
  • 24-2-418 à BOX 371
  • 24-2-419 à BOX 371

Plantilla placa:

112345
A protCneg24-2-40724-2-41124-2-41524-2-419
B blancCneg24-2-40724-2-41124-2-41524-2-419
C protCpos CASPR124-2-40824-2-41224-2-416 
D blancCpos CASPR124-2-40824-2-41224-2-416 
E prot24-2-40524-2-40924-2-41324-2-417 
F blanc24-2-40524-2-40924-2-41324-2-417 
G prot24-2-40624-2-41024-2-41424-2-418 
Hblanc24-2-40624-2-41024-2-41424-2-418 

Protocolo:

  • Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
  • Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
  • Diluir los  sueros:
    • Screening:  diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
  • Incubar con los sueros 1h a RT
  • Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
  • Ac secundarios:
    • Screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
  • Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
  • Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
  • Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
  • Leer a 450-570 nm

Resultado:

12345
A0,1470,1180,1290,140,152
B0,1590,1490,1470,1380,449
C1,1930,1570,1560,1260
D0,1060,1670,2380,1210
E0,2060,1850,140,1550
F0,1550,1740,2920,1360
G0,1240,110,130,1210
H0,1120,1540,2310,180
Repetir las muestras con blancos muy elevados
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