2024.02.22: ELISA CNTN1/NF-155 (TITULACIÓN Y SUBCLASES)

ELISA CASPR1 (TITULACIÓN Y SUBCLASES)

Muestras:

• 24-2-0295: confirmar CNTN1
• 24-2-0299: titulación y subclases CNTN1
• 24-2-0303: titulación y subclases NF155

Plantilla placa:

• Columnas de CNTN1: 1,2,3 y 4
• Columnas de NF-155: 5,6 y 7

Protocolo:

• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Diluir los  sueros:
  • Subclases:  diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
  • Titulación: diluir sueros a 1/100, 1/300, 1/900, 1/2700, 1/8100 y 1/24300 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
• Incubar con los sueros 1h a RT
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Ac secundarios:
  • Screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
  • Subclases: Incubar con IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-570 nm

Resultado: