Coating células/transfección Culture slides
8 culture slides: Perfil anti-nodales/paranodales + 4 culture slides CNTN1
Protocolo:
- Preparar mezclas transfección cada culture slide (8 pozos)
- 2 ug DNA + 40 ul Optimem
- 3,2 ul lipofectamina + 40 ul Optimem
- Juntar y dejar reposar mínimo 5 minutos
- Poner 300 ul de medio HEK a cada pozo
- Poner 120.000 cels (HEK293) a cada pozo
- Poner 10 ul de mezcla de transfección a cada pozo.
ICC Perfil nodales/paranodales BD
CNTN1, NF140, NF155, NF186 (cels fijadas, suero 1/100) –>1 culture slide transfectado 30/01/2024
Muestras:
- Cneg
- Cpos
Protocolo:
ICC Perfil nodales/paranodales BD
CNTN1, NF140, NF155, NF186 (cels fijadas, suero 1/100)
1 culture slide transfectado 30/01/2024
Muestras:
- Cneg
- Cpos
Protocolo:
- Incubar 1hora a T. ambiente los sueros diluidos a 1:100 con solución de bloqueo.
- Lavar 3 veces con PBS 1X.
- Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac primario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
- Lavar 3 veces con PBS 1X
- Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac secundario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
- CNTN1: RAG488 + RAH594 a Rabbit Serum 1/40
- NF155, NF140, NF186: GAC488 + GAH594 a Goat Serum 5%.
- CASPR1: GAR 488 + GAH594
- Lavar 3 veces con PBS 1X
- Poner medio de montaje “fluoromount” i cobrir con un cubreobjetos.
- Analizar resultados al microscopio de fluorescencia.
Resultado:
| Mostra | BOX | CNTN1 | NF140 | NF155 | NF186 |
| Control Positivo | Controls | +++ | +++ | +++ | +++ |
| Control Negativo | Controls | – | – | – | – |
