2024.02.09: ICQ Perfil nodales/paranodales BD + ELISA CASPR1 (DILUCIONES Y SUBCLASES)

ICQ Perfil nodales/paranodales BD

Protocolo:

• Incubar 1hora a T. ambiente los sueros diluidos a 1:100 con solución de bloqueo.
• Lavar 3 veces con PBS 1X.
• Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac primario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
• Lavar 3 veces con PBS 1X
• Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac secundario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
  • CNTN1: RAG488 + RAH594 a Rabbit Serum 1/40
  • NF155, NF140, NF186: GAC488 + GAH594 a Goat Serum 5%.
  • CASPR1: GAR 488 + GAH594
• Lavar 3 veces con PBS 1X
• Poner medio de montaje “fluoromount” i cobrir con un cubreobjetos.
• Analizar resultados al microscopio de fluorescencia.

Muestras:

• Control positivo
• 24-2-0294 (BOX 367)
• 24-2-0331 (BOX 368)
• 24-2-0295 (BOX 367)

Resultado

ELISA CASPR1 (TITULACIÓN Y SUBCLASES)

Muestras:

• Control negativo y control positivo CASPR1
• 24-2-0297 (repetir) –> box 367
• 24-2-0298 (repetir) –>  box 367
• 24-2-0300 (repetir) –> box 367
• 24-2-0301 titular + subclases –> box 367

Protocolo:

• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Diluir los  sueros:
  • Subclases:  diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
  • Titulación: diluir sueros a 1/100, 1/300, 1/900, 1/2700, 1/8100 y 1/24300 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
• Incubar con los sueros 1h a RT
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Ac secundarios:
  • Screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
  • Subclases: Incubar con IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-570 nm

Resultado: