2024.01.23: Separación IgG

Muestras:

• Cneg 23-2-1040 Box 346
• Cneg 23-2-1041 Box 346
• Plasmaféresis Morón (NF155+) NHC 1744206
• Plasmaféresis De Haro (NF155+) NHC 1768641
• 22-2-1027 Box 312 (NF186+)
• 22-2-1028 Box 312 Berni Sagaste (panNF+)
• Plasmaféresis A.Vidal Pla (CNTN1+) NHC 1568009
• 21-2-94 Box 254 Alberto Leggeri (CNTN1+)

Protocolo: kit Melon gel IgG Spin purification kit (ref 45206 ThermoFisher)

1. Equilibrar kit a temperatura ambiente (~15 minutos).
2. Agitar la botella que contiene el Purification suport (sin hacer vórtex) para obtener una suspensión uniforme. Para garantizar una dispensación adecuada de la suspensión de gel, utilizar una punta de pipeta cortada para dispensar 500 µl de suspensión en una Spin column colocada en un tubo de microcentrífuga.
3. Centrifugar el conjunto columna/tubo (sin poner la tapa interna) durante 1 minuto a 5000 g, luego desechar el flow-through
4. Añadir 300 µl de Purification buffer a la columna, centrifugar a 5000 g durante 10 segundos y desechar el flow-through. Repetir este lavado una vez. Colocar la tapa inferior en la columna.
5. Diluir los sueros 1/10 con purification buffer: en este caso preparo 1ml 1/10 (900 ul PBS1x + 100ul suero), por lo que hago los pasos 6-8 2 veces.
6. Añadir 500µL de suero diluido a la columna. Tapar la columna e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente.
7. Retirar la tapa inferior de la columna, aflojar la tapa superior y volver a insertar la columna de centrifugación en el tubo de recogida.
8. Centrifugar durante 1 minuto a 5000g para recoger el anticuerpo purificado en el tubo de microcentrífuga.