*Se usan 6 portas transfectados durante 2 días (día 05/12/23)
Muestras: se testan las muestras de Milán para el paper “A prospective open-label trial with rituximab in patients with chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy not responding to conventional immune therapies.”
- Portas 1 y 2: muestras Italia 1-16 (de 23-2-1355 a 23-2-1370)
- Porta 3:
- 23-2-1371 (Italia 17)
- 23-2-1371 (Italia 18)
- Cneg
- 22-2-374
- 23-2-554
- 23-2-656
- 23-2-1110
- 23-2-1331
- Porta 4:
- Subclases 23-2-554
- Subclases 23-2-656
- Porta 5:
- Subclases 23-2-1110
- Subclases 23-2-1331
- Porta 6:
- Subclases 136-8
- Subclases 22-2-374
Protocolo cels vivas: se hacen lavados con PBS1x entre cada paso. No pongo anticuerpo comercial porque así no hay cruce de canales
- Incubar con suero 1/100 diluídos en medio HEK293: 1h a 37ºC
- Fijar 10min con PFA 4%
- Bloquear con Goat serum 5%: 1h RT (ME HE OLVIDADO DE BLOQUEAR)
- Incubar con anticuerpos secundarios:
- IgG totales: GAH594IgG 1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
- Subclases: MAH488 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 1/200 en Goat serum 5%: 1h RT
- Montar con Fluoromount
Resultado:
- Todas las muestras de Italia son negativas
- IgG totales:
- Cneg: neg
- 22-2-374: pos
- 23-2-554: pos débil
- 23-2-656: pos
- 23-2-1110: pos
- 23-2-1331: pos
- Subclases: en general se ve todo muy bajo, y no se pueden determinar bien las subclases con estos Ac secundarios
- 23-2-554: no se ve claro
- 23-2-656: parece IgG3
- 23-2-1110: no se ve claro
- 23-2-1331: parece IgG2
- 136-8: IgG3 clarísimo
- 22-2-374: parece IgG1
