2 culture slides perfil: hago una prueba con Lipofectamina 3000 que tenemos en la nevera (aunque caducada desde 2020).
*Se hizo coating con poly-D-lys 1/40 el día antes.
A la vez hago transfección de perfiles para Immuno (con el protocolo habitual de MACSfectin) y así puedo comparar las dos transfecciones.
Protocolo:
- Preparar mezclas transfección cada culture slide (8 pozos)
- 2 ug DNA + 40 ul Optimem + 4ul de P3000*
- *En el protocolo de la lipofectamina 3000 pone que hay que añadir 2ul del producto P3000 cada ug de DNA.
- 3,2 ul lipofectamina3000 + 40 ul Optimem
- 2 ug DNA + 40 ul Optimem + 4ul de P3000*
- Juntar y dejar reposar mínimo 15 minutos
- Poner 300 ul de medio HEK a cada pozo
- Poner 120.000 cels (HEK293) a cada pozo
- Poner 10 ul de mezcla de transfección a cada pozo
- Al día siguiente:
- Quitar medio
- Fijar PFA4% 10 min
- Quitar PFA y lavar con PBS1x
- Quitar los pozos del culture slide
- Congelar a -80ºC: en este caso uso uno de los dos culture slides en immuno para comprobar que ha salido bien la transfección con lipo3000: HA SALIDO BIEN LA TRANSFECCIÓN CON LIPOFECTAMINA 3000
