Muestras: muestras Milán (Eduardo Noville-Orazio) para revisión del paper “A prospective open-label trial with rituximab in patients with chronic inflammatory demyelinating polyradiculoneuropathy not responding to conventional immune therapies.”
- 1) 23-2-1355
- 2) 23-2-1356
- 3) 23-2-1357
- 4) 23-2-1358
- 5) 23-2-1359
- 6) 23-2-1360
- 7) 23-2-1361
- 8) 23-2-1362
- 9) 23-2-1363
- 10) 23-2-1364
- 11) 23-2-1365
- 12) 23-2-1366
- 13) 23-2-1367
- 14) 23-2-1368
- 15) 23-2-1369
- 16) 23-2-1370
- 17) 23-2-1371
- 18) 23-2-1372
- 136-8 (MRVM Caspr1+ caja Caspr1 Cinta): IgGtot y subclases
- CIDP78 (misma muestra que anterior pero de la caja de CIDP): IgGtot y subclases
Protocolo: uso placa de CASPR1 coating 27/11/2023 dejada 2 días en agitación con la proteína. Congelada día 29/11/2023
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Diluir los sueros:
- Subclases y screening: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Incubar con los sueros 1h a RT
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Ac secundarios:
- Titulación / screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Subclases: Incubar con MAH HRP* IgG1 o IgG2 o IgG3 o IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1%: 100 ul/pozo, 45 min
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 23-2-1355 | 23-2-1359 | 23-2-1363 | 23-2-1367 | 23-2-1371 | 136-8 IgG1 | CIDP78 IgG1 | |||||
| B blanc | 23-2-1355 | 23-2-1359 | 23-2-1363 | 23-2-1367 | 23-2-1371 | 136-8 IgG1 | CIDP78 IgG1 | |||||
| C prot | 23-2-1356 | 23-2-1360 | 23-2-1364 | 23-2-1368 | 23-2-1372 | 136-8 IgG2 | CIDP78 IgG2 | |||||
| D blanc | 23-2-1356 | 23-2-1360 | 23-2-1364 | 23-2-1368 | 23-2-1372 | 136-8 IgG2 | CIDP78 IgG2 | |||||
| E prot | 23-2-1357 | 23-2-1361 | 23-2-1365 | 23-2-1369 | 136-8 IgG tot | 136-8 IgG3 | CIDP78 IgG3 | |||||
| F blanc | 23-2-1357 | 23-2-1361 | 23-2-1365 | 23-2-1369 | 136-8 IgG tot | 136-8 IgG3 | CIDP78 IgG3 | |||||
| G prot | 23-2-1358 | 23-2-1362 | 23-2-1366 | 23-2-1370 | CIDP78 IgG tot | 136-8 IgG4 | CIDP78 IgG4 | |||||
| Hblanc | 23-2-1358 | 23-2-1362 | 23-2-1366 | 23-2-1370 | CIDP78 IgG tot | 136-8 IgG4 | CIDP78 IgG4 |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 0,006 | 0,007 | 0,006 | 0,006 | 0,019 | 0,575 | 0,475 | |||||
| B blanc | 0,019 | 0,039 | 0,013 | 0,029 | 0,026 | 0,007 | 0,016 | |||||
| C prot | 0,014 | 0,014 | 0,007 | 0,009 | 0,011 | 0,13 | 0,112 | |||||
| D blanc | 0,013 | 0,049 | 0,01 | 0,028 | 0,012 | 0,081 | 0,075 | |||||
| E prot | 0,008 | 0,026 | 0,006 | 0,01 | 0,882 | 0,061 | 0,042 | |||||
| F blanc | 0,011 | 0,046 | 0,023 | 0,058 | 0,017 | 0,006 | 0,007 | |||||
| G prot | 0,009 | 0,01 | 0,008 | 0,018 | 0,849 | 0,519 | 0,448 | |||||
| Hblanc | 0,018 | 0,008 | 0,01 | 0,022 | 0,039 | 0,01 | 0,009 |
Resultados:
- Todas las muestras de Milán son CASPR1 negativas
- 136-8 y CIDP78 tienen exactamente los mismos resultados: IgG1, IgG4: es raro porque en el paper de Elba y en el Interlab validation la muestra de MRVM dio también IgG3… y ahora no sale. El anticuerpo secundario IgG3 sí que funciona porque Marta lo ha comprobado con sus CNTN1+, así que debe ser que al congelar-descongelar el suero tantas veces, las IgG3 se pierden. De todos modos, haré ICC de doble CNTN1/Caspr1 con los anticuerpos de subclases.
