2023.12.05: Coating células + transfección Culture slides doble CNTN1/CASPR1 (MACSfectin)

6 culture slides: doble CNTN1/CASPR1

*El día anterior se hace coating de Poly-D-lys 1/40

Protocolo:

• Preparar mezclas transfección cada culture slide (8 pozos)
  • 2 ug DNA + 40 ul Optimem
    • Doble CNTN1/Caspr1: 1,4 ug CNTN1 + 0,8 ug Caspr1
  • 3,2 ul MACSfectin + 40 ul Optimem
• Juntar y dejar reposar mínimo 5 minutos
• Poner 300 ul de medio HEK a cada pozo
• Poner 120.000 cels (HEK293) a cada pozo
• Poner 10 ul de mezcla de transfección a cada pozo
• Aprox 48 horas después:
  • Quitar medio
  • Fijar PFA4% 10 min
  • Quitar PFA y lavar con PBS1x
  • Quitar los pozos del culture slide
  • Congelar a -80ºC