Objetivo: ver cómo marcan los co-cultivos las muestras de MRVM absorbidas con Doble CNTN1/CASPR1 y con HEKs sin transfectar (absorciones hechas por Elba para su paper). Las absorciones se hicieron a dilución 1/800, y por tanto se ponen directamente en las immunos.
Muestras: Cubres 1-3 médula rata 07/09/2023. Cubres 4-6 médula rata 27/10/2023
- MRVM absorb. doble CNTN1-Caspr1
- MRVM absorb. HEKs sin transfectar
- Cneg 217-33
- MRVM absorb. doble CNTN1-Caspr1
- MRVM absorb. HEKs sin transfectar
- Cneg 217-33
Protocolo cels fijadas: entre cada paso hacer lavados con PBS1x
- Fijar y permeabilizar 10min con metanol -20ºC
- Incubar con sueros absorbidos sin diluir, y con suero Control diluído 1/100 en PBS1x: 2h RT
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 1h a RT (los pongo juntos)
- anti–NFh 1/300 (ME HE EQUIVOCADO, EN REALIDAD QUERÍA PONER CASPR1)
- anti-MBP (808401) 1/300
- Incubar con anticuerpos secundarios GAH488 IgG + GAC594 + GAM647 diluídos 1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
- Montar con Fluoromount
Resultado:
- Cubres 1-2: MRVM absorbida no marca nada, seguramente porque la absorción se hizo a 1/800
- Cubres 4-6: aún no hay mielina
