Objetivo: ver cómo marcan los pacientes Caspr1+ en los co-cultivos en vivo. Hacer fotos de marcaje de neuronas DRG en paciente CIDP1 (para la revisión del paper de Retrogenix)
Muestras: Cubres 1-6 co-cultivos DRG 07/09/2023. Cubres 7-12 co-cultivos DRG 27/10/2023
- CIDP1
- 136-8
- 22-2-374
- 23-2-656
- 23-2-554
- Cneg 217-33
- CIDP1: hechas como neuronas DRG (fijadas con PFA4% 10 min, y directamente ac.secundario, no se contratiñen con nada)
- Cneg 217-33: hechas como neuronas DRG (fijadas con PFA4% 10 min, y directamente ac.secundario, no se contratiñen con nada)
- 136-8
- 22-2-374
- GDP (CIDP15)
- Cneg 217-33
Protocolo cels vivas: entre cada paso hacer lavados con PBS1x
- Incubar con sueros diluídos 1/50 en medio NG: 2h 37ºC
- Fijar y permeabilizar 10min con metanol -20ºC (excepto los cubres 7 y 8, que se permeabilizan con PFA4%)
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 1h a RT (los pongo juntos)
- anti–NFh 1/300 (ME HE EQUIVOCADO, EN REALIDAD QUERÍA PONER CASPR1)
- anti-MBP (808401) 1/300
- Incubar con anticuerpos secundarios GAH488 IgG + GAC594 + GAM647 diluídos 1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
- Montar con Fluoromount
Resultado:
- Los co-cultivos del día 07/09 tienen demasiadas células y ya no se ven demasiado bien.
- En los co-cultivos del día 27/10/2023 todavía hay muy poca mielina.
- La muestra CIDP1 no marca prácticamente nada ni en el cubre 1 ni en el 7. Marca igual que el control negativo.
- Las muestras Caspr1+ marcan mucho todo
