2023.10.24: ICC co-cultivos médula (día 47 – rata 07/09/2023)

Prueba co-cultivos médula:

1. Explante médula P/L
2. Explante médula matrigel
3. Médula disgregada con glía

Protocolo cels fijadas:

• Fijar 20min con PFA 4%
• Permeabilizar 10min con metanol -20ºC
• Bloquear con Goat serum 5%: 30min RT
• Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 2h a RT (los pongo juntos)
  •  anti–Caspr1 (ab34151, abcam) 1/300
  • anti-MBP (808401, Biolegend) 1/300
  • anti-NFh (AB5539, Merck) 1/500
• Incubar con anticuerpos secundarios  GAC488 IgG + GAR594 + GAM647 diluídos  1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
• Montar con Fluoromount

Resultado:

1. Explante médula P/L: no hay mielina
2. Explante médula matrigel: no hay mielina
3. Médula disgregada con glía: hay mucha mielina, y se ve muy bien el Caspr1 (paranodos formados)