2023.09.28: ICC co-cultivos IgG sueros Caspr1+ (día 69 – rata 20/07/2023)

Cojo 1 Culture Slide de co-cultivos 20/07/23 para ver cómo marcan las IgG separadas de sueros Caspr1+

Protocolo: uso el mismo protocolo que el paper de Labasque 2014

• Fijar 10min con PFA4%
• 1 lavado con PBS2x
• Bloquear con Goat serum 5% con tritón 0,1%
• Incubar con IgG de pacientes diluídos en Goat serum 5% (en el paper las hacen a 1/500, yo hago 1/500 y 1/100). Tener en cuenta que las IgG ya están diluídas 1/10 (por lo tanto, las diluyo 1/10 o 1/50) :2h RT:

1. IgG 22-2-374 1/500
2. IgG 22-2-374 1/100
3. IgG 136-8 1/500
4. IgG 136-8 1/100
5. IgG 23-2-656 1/500
6. IgG 23-2-656 1/100
7. IgG 23-2-554 1/500
8. IgG 23-2-554 1/100

• 3 lavados con PBS1x
• Incubar con anticuerpo primario diluído en Goat serum 5% (2h RT): MBP anti-Myelin basic protein SMI99, 808401 (Biolegend). Dil. 1/100 (mouse)
• 3 lavados con PBS1x
• Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5% (1/500): GAH594 IgG (suero) + GAM488 (MBP)
• 3 lavados con PBS1x
• Montar con fluoromount

Resultado: no se ve la mielina… puede que la permeabilización con tritón 0,1% no sea suficiente?? No puedo ver si las IgG de los pacientes Caspr1+ marcan los paranodos.