2023.08.21: ICC co-cultivos (2) (día 31 – rata 20/07/2023)

Cojo cubres de co-cultivos DRG 1/06/23, 1 Culture Slide de co-cultivos 20/07/23, y cubres de médula disgregada con glía 20/7/23 para ver cómo marcan algunos sueros.

Muestras:

1. CIDP15 (GDP1, LIF+)
2. 151-21 (GDP2)
3. 22-2-374 (Caspr1+)
4. 136-08 (Caspr1+)
5. 23-2-656 (Caspr1+)
6. 23-2-554 (Caspr1+)
7. 23-2-540 Box 331 (suero Alemania buscar antígeno)
8. Cneg 204-5

Protocolo:

• Incubar con suero 1/100 en medio de mielinización (6 ul en 300 ul) : 2h 37ºC
• 1 lavado con PBS1x
• Fijar 20 min con PFA 4%
• 1 lavado con PBS1x
• Bloquear 30min con Goat serum 5% tritón 0,5%
• Incubar con anticuerpo primario diluído en Goat serum 5% tritón 0’5% (2h RT): MBP anti-Myelin basic protein SMI99, 808401 (Biolegend). Dil. 1/100 (mouse)
• 3 lavados con PBS1x
• Incubar 1h con Ac. secundarios diluídos en Goat serum 5% tritón 0’5% (1/750): GAH488 IgG (suero) + GAM594 (MBP)
• 3 lavados con PBS1x
• Montar con fluoromount

Resultado: no hay mielina en ninguno de los cubres ni en el culture slide. En los cubres de médula disgregada se observan varios tipos de células.

 Analizo sólo el patrón de tinción en las neuronas DRG (nDRG) y neuronas médula (nMed):

1. CIDP15 (GDP1, LIF+): nDRG +, nMed –
2. 151-21 (GDP2): nDRG -, nMed –
3. 22-2-374 (Caspr1+): nDRG ++, nMed repetir
4. 136-08 (Caspr1+): nDRG ++, nMed ++
5. 23-2-656 (Caspr1+): nDRG ++, nMed repetir
6. 23-2-554 (Caspr1+): nDRG ++, nMed repetir
7. 23-2-540 Box 331 (suero Alemania buscar antígeno): nDRG ++, nMed repetir
8. Cneg 204-5: nDRG -, nMed repetir