Objetivo: comprobar cotransfección de LGI4/ADAM22 con el anticuerpo primario nuevo (invitrogen), el de abcam no funciona. La mitad de los portas están transfectados solo con LGI4 y la otra mitad con cotransfección ADAM22 + LGI4
Protocolo:
- Permeabilizar con triton 0.3% 5 minutos la mitad de los pozos.
- 1 lavado PBS1x
- Bloquear 1 hora con Goat serum 5%
- Ac primario –> Anti-LGI4 invitrogen (PA5-60416) 1/50 – (Rabbit)
- 3 lavados PBS1x
- Ac secundario GAR488 IgG 1/500 en goat serum
- 3 lavados PBS1x
- Montar con fluoromount
Resultados:
Los portas están bien transfectados, se ven bien tanto cotransfectados (adam22 + lgi4) como los transfectados solo con LGI4. Este anticuerpo funciona bien. Positivo tanto permeabilizado como no permeabilizado. Haremos cribaje de nuestras CIDPs.
Permeabilizado- transfección LGI4
Permeabilizado- transfección doble LGI4 / ADAM22
No permeabilizado- transfección LGI4
No permeabilizado- transfección doble
