2023.01.17- 2023.01.18 – ELISA LIF

Coating ELISA LIF– Dia 1

Proteina Abcam LIF- ab287941. Lot GR3424610. [LIF]i = 0,2 mg/ml (200 ug/ml)

• LIF: 48 pozos []f = 3 ug/l à 2500 ul buffer + 37.5 ul de proteina

Poner 50 uL en cada pozo, en los blancos poner 50 de buffer solo. Dejar toda la noche en agitación, cubierto con parafilm y papel de plata en la cámara de 4 grados del final.

ELISA LIF– Dia 2

Pasamos las otras muestras de MRVM que es positiva en la primera muestra.

Protocolo:

1. Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
2. Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% — 200 ul por pozo
3. Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%.
4. Diluir los  sueros en leche 5% en PBS-tween 0’1% — 100ul por pozo
5. Incubar con los sueros 1h
6. Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
7. Incubar 45min con anticuerpo secundario: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% — 100 ul/pozo
8. Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
9. Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) — 100 ul/pozo
10. Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
11. Leer a 450-570 nm

Resultados:

La OD del positivo ha salido bastante más bajita que en ELISAs anteriores que es sobre 0.6-0.8, pero hay diferencia con el resto que son todos negativos.