Por la mañana saco el porta de Cinta que transfectó el miércoles18.01 por la tarde
- Retirar el medio HEK de las placas
- Fijar con PFA 4% durante 10 minutos a temperatura ambiente
- Retirar el PFA 4% y poner PBS 1x en los pozos
- Retirar suavemente la pieza de plástico
Muestras:
- CIDP 40
- CIDP 41
- CIDP 42
- CIDP 46
- CIDP 47
- CIDP 48
- CIDP 50
- CIDP 52
Protocolo
- Bloquear con goat serum 5% 1h
- Suero 1/50 en goat serum 1 hora
- 3 lavados con PBS1 x
- 1 hora Ac primario NCAM2: anti-NCAM2, ab115305 (abcam)–> 1/100 (rabbit) en goat serum
- 3 lavados con PBS1x
- 1hora Ac secundario diluido 1/500 en goat serum –> GAR488 + GAH 594 IgG
- 3 lavados con PBS 1x
- Montar con Fluoromount
Resultados
Se han trasnfectado super bien las células. A partir de ahora el NCAM2 se tiene que tranfectar una tarde y sacar a los dos días por la mañana. Todas las CIDPs que he pasado son negativas.
