2023.01.17 – ICC HEK-LIF Subclases

Objetivo: Conocer la subclase del anticuerpo anti-LIF.

Muestras:

1. GDP IgG totales
2. GDP IgG1
3. GDP IgG2
4. GDP IgG3
5. GDP IgG4
6. CIDP 69
7. CIDP 100
8. C neg

Protocolo:

1. Permeabilizar con triton 0.3% 5 minutos
2. 1 lavado PBS1x
3. Bloquear 1 hora con Goat serum 5%
4. Suero 1/50 en goat serum
5. 3 lavados PBS1x
6. Ac primario: Anti-LIF invitrogen 1/100 // goat serum en subclases
7. 3 lavados PBS1x
8. Ac secundario
   1. IgG totales GAR488 IgG + GAH594 IgG 1/500 en goat serum                      
   1. Subclases: MAH 488 IgG1 o IgG2 o IgG3 o IgG4 1/200
9.    3 lavados PBS1x
10. Montar con Fluromount                                                                                                           

Resultados:

Todas las subclases son negativas. Las dos CIDPs que quedaban por pasar son negativas.

Positivo arriba, negativo abajo verde anti-LIF, rojo suero.