2023.01.17- ICC HEK-LGI4/ADAM22

Objetivo: saber si se ha transfectado correctamente LGI4 con o sín ADAM22 que lo fija a la membrana. Así es como lo transfecté:

Protocolo:

1. Bloquear con goat serum 5% 1h
2. Incubar 1h con anticuerpos primarios diluidos en  goat serum 5%
   1. LGI4: anti-LGI4, ab173297 (abcam). Dil 1/100 (rabbit)
   1. Anti-HA (ADAM22 y 23 tienen un tag que es HA). Dil 1/1000  (Rat)
3. 3 lavados PBS 1x
4. Ac secundario 1 hora en goat serum
   1. Pozos anticuerpo primario LGI4 –> GAR488 1/500
   2. Pozos anticuerpo primario anti-HA –> GARat488 4/500
5. 3 lavados PBS1X
6. Montar con fluoromount

Resultados:

El LGI4 creo que sí se ha transfectado pero el ADAM22 no. Los portas no permeabilizados no se ve bien el LGI4 pero los permeabilizados por Cinta ayer sí. Por tanto, haremos transformación de nuevo del ADAM22 y probablemente necesitaremos permeabilizar.

LGI4 permeabilizado arriba // LGI4 no permeabilizado abajo