2022.07.27: ELISA NF140, NF155, CASPR1, CNTN1 (screening EM vacunas)

Objetivo: testar las muestras del estudio “Efficacy and neurological adverse effects of COVID-19 vaccination in patients immunocompromised for multiple sclerosis“

Muestras: (46 muestras del estudio EM vacunas, Cpos y Cneg)

	NHC	Tiempo	Resultado NF140	Resultado NF155	Resultado CNTN1	Resultado CASPR1
45	1673967	T3	neg	neg	neg	neg
46	1718374	T3	neg	neg	neg	neg
47	1724109	T3	neg	neg	neg	neg
48	1760298	T3	neg	neg	neg	neg
49	1774129	T3	neg	neg	neg	neg
50	1781650	T3	neg	neg	neg	neg
51	1802061	T3	neg	neg	neg	neg
52	1806805	T3	neg	neg	neg	neg
53	1053831	T3	neg	neg	neg	neg
54	1067401	T3	neg	neg	neg	neg
55	1090182	T3	neg	neg	neg	neg
56	1335436	T3	neg	neg	neg	neg
57	1347111	T3	neg	neg	neg	neg
58	1388963	T3	neg	neg	neg	neg
59	1435237	T3	neg	neg	neg	neg
60	1460652	T3	neg	neg	neg	neg
61	1492808	T3	neg	neg	neg	neg
62	1496265	T3	neg	neg	neg	neg
63	1502610	T3	neg	neg	neg	neg
64	1518208	T3	neg	neg	neg	neg
65	1555633	T3	neg	neg	neg	neg
66	157282	T3	neg	neg	neg	Pos
67	1614932	T3	neg	neg	neg	neg
68	1668530	T3	neg	neg	neg	neg
69	1730429	T3	neg	neg	neg	neg
70	1744031	T3	neg	neg	neg	neg
71	1797029	T3	neg	neg	neg	neg
72	1820271	T3	neg	neg	neg	neg
73	229342	T3	neg	neg	neg	neg
74	352797	T3	neg	neg	neg	neg
75	379372	T3	neg	neg	neg	neg
76	47690	T3	neg	neg	neg	neg
77	532468	T3	neg	neg	neg	neg
78	616940	T3	neg	neg	neg	Pos
79	66440	T3	neg	neg	neg	neg
80	837590	T3	neg	neg	neg	neg
81	896114	T3	neg	neg	neg	neg
82	917368	T3	neg	neg	neg	neg

	NHC	Código externo	Tiempo	Box	Posición	Resultado NF140	Resultado NF155	Resultado CNTN1	Resultado CASPR1
83	4717546	VACEM16	T3	SANT PAU T3.1	A2	neg	neg	neg	neg
84	4719830	VACEM11	T3	SANT PAU T3.1	A3	neg	neg	neg	neg
85	70283823	VACEM12	T3	SANT PAU T3.1	A4	neg	neg	neg	neg
86	70628584	VACEM18	T3	SANT PAU T3.1	A5	neg	neg	neg	neg
87	5075132	VACEM7	T3	SANT PAU T3.1	A6	neg	neg	neg	neg
88	238309	VACEM28	T3	SANT PAU T3.1	A7	neg	neg	neg	neg
89	70078519	VACEM14	T3	SANT PAU T3.1	A9	neg	neg	neg	neg
90	720338	VACEM19	T3	SANT PAU T3.1	B1	neg	neg	neg	neg

Día antes: Coating ELISA NF155, CASPR1, CNTN1, NF140

[CASPR1]i = 0,789 mg/ml, [NF155]i = 0,20 mg/ml, [CNTN1]i = 0,25 mg/ml,[NF140]i = 0,25 mg/ml

Buffer coating: carbonate-bicarbonate (100 ml agua destilada + 1 pastilla C3041 Sigma)

CASPR1: 48 pozos []f = 5 ug/ml: 2,5 ml buffer + 15,8 ul
NF155: 48 pozos []f = 1 ug/ml: 2,5 ml buffer + 12,5 ul
CNTN1: 48 pozos []f = 1 ug/ml: 2,5 ml buffer + 10 ul
NF140: 48 pozos []f = 5 ug/ml: 2,5 ml buffer + 50 ul

Protocolo: 4 placas enteras à NF140, NF155, CNTN1, CASPR1

Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% à 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
Diluir los sueros:
- Screening: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
Incubar con los sueros 1h
Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
Incubar 45min con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
Leer a 450-620 nm

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	Cneg	47	51	55	59	63	67	71	75	79	83	87
Bblanc	Cneg	47	51	55	59	63	67	71	75	79	83	87
C prot	Cpos	48	52	56	60	64	68	72	76	80	84	88
Dblanc	Cpos	48	52	56	60	64	68	72	76	80	84	88
E prot	45	49	53	57	61	65	69	73	77	81	85	89
F blanc	45	49	53	57	61	65	69	73	77	81	85	89
G prot	46	50	54	58	62	66	70	74	78	82	86	90
Hblanc	46	50	54	58	62	66	70	74	78	82	86	90

Resultado:

NF140	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,076	0,077	0,079	0,088	0,084	0,067	0,061	0,069	0,072	0,073	0,065	0,069
B blanc	0,12	0,067	0,062	0,065	0,073	0,062	0,053	0,059	0,084	0,119	0,104	0,068
C prot	0,765	0,059	0,062	0,058	0,107	0,059	0,063	0,072	0,166	0,078	0,073	0,083
D blanc	0,067	0,055	0,058	0,049	0,054	0,05	0,066	0,057	0,378	0,066	0,058	0,067
E prot	0,115	0,073	0,069	0,064	0,062	0,065	0,054	0,068	0,057	0,061	0,074	0,071
F blanc	0,093	0,066	0,055	0,087	0,049	0,056	0,059	0,145	0,057	0,057	0,06	0,1
G prot	0,062	0,058	0,085	0,055	0,063	0,056	0,048	0,045	0,048	0,06	0,063	0,053
Hblanc	0,071	0,06	0,224	0,06	0,074	0,062	0,046	0,054	0,056	0,056	0,069	0,082

NF155	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,121	0,076	0,07	0,077	0,068	0,071	0,052	0,06	0,08	0,087	0,086	0,064
B blanc	0,118	0,062	0,06	0,073	0,074	0,057	0,059	0,048	0,078	0,085	0,088	0,059
C prot	0,891	0,053	0,052	0,051	0,071	0,05	0,056	0,055	0,246	0,067	0,059	0,058
D blanc	0,112	0,054	0,049	0,054	0,048	0,048	0,051	0,053	0,325	0,054	0,058	0,056
E prot	0,091	0,07	0,057	0,079	0,053	0,048	0,06	0,106	0,067	0,066	0,052	0,058
F blanc	0,087	0,071	0,053	0,091	0,043	0,052	0,064	0,131	0,06	0,059	0,056	0,06
G prot	0,073	0,074	0,179	0,07	0,1	0,06	0,06	0,049	0,047	0,063	0,057	0,054
Hblanc	0,076	0,06	0,224	0,067	0,071	0,062	0,049	0,054	0,055	0,058	0,056	0,054

CNTN1	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,08	0,094	0,092	0,082	0,085	0,086	0,073	0,079	0,076	0,088	0,077	0,08
B blanc	0,133	0,077	0,069	0,073	0,077	0,073	0,075	0,069	0,085	0,101	0,102	0,087
C prot	0,875	0,075	0,065	0,067	0,077	0,067	0,078	0,077	0,27	0,081	0,085	0,079
D blanc	0,14	0,056	0,06	0,057	0,076	0,064	0,076	0,075	0,333	0,082	0,073	0,068
E prot	0,087	0,077	0,072	0,104	0,066	0,073	0,071	0,177	0,078	0,109	0,081	0,076
F blanc	0,09	0,075	0,067	0,103	0,075	0,075	0,087	0,162	0,078	0,081	0,086	0,073
G prot	0,099	0,057	0,241	0,088	0,092	0,078	0,075	0,101	0,071	0,071	0,079	0,076
Hblanc	0,084	0,078	0,216	0,088	0,093	0,079	0,066	0,076	0,062	0,063	0,063	0,104

CASPR1	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,079	0,073	0,065	0,069	0,076	0,078	0,076	0,094	0,076	0,087	0,082	0,074
B blanc	0,121	0,086	0,096	0,086	0,084	0,078	0,08	0,075	0,093	0,125	0,102	0,07
C prot	0,956	0,079	0,09	0,097	0,068	0,074	0,072	0,073	0,213	0,071	0,069	0,069
D blanc	0,08	0,071	0,083	0,087	0,071	0,067	0,085	0,08	0,43	0,082	0,08	0,069
E prot	0,122	0,081	0,088	0,085	0,083	0,088	0,097	0,11	0,082	0,071	0,094	0,079
F blanc	0,115	0,086	0,082	0,132	0,066	0,08	0,059	0,232	0,076	0,089	0,074	0,08
G prot	0,083	0,078	0,165	0,085	0,118	0,224	0,062	0,07	0,155	0,091	0,078	0,067
Hblanc	0,091	0,08	0,209	0,089	0,107	0,082	0,074	0,086	0,075	0,081	0,079	0,097

2022.07.27: ELISA NF140, NF155, CASPR1, CNTN1 (screening EM vacunas)

Published by Cinta Lleixa

Leave a Reply Cancel reply