Objetivo: testar las muestras del estudio “Efficacy and neurological adverse effects of COVID-19 vaccination in patients immunocompromised for multiple sclerosis“

Muestras: (22 muestras del estudio EM vacunas de H.Santpau, Cpos y Cneg) àno pongo Cpos de NF140 ni de CASPR1 porque no hay mucho

			Resultado NF140	Resultado NF155	Resultado CNTN1	Resultado CASPR1
23	1063758	T3	neg	neg	neg	neg
24	1097811	T3	neg	neg	neg	neg
25	1113212	T3	neg	neg	neg	neg
26	1115327	T3	neg	neg	neg	neg
27	1122921	T3	neg	neg	neg	neg
28	1124890	T3	neg	neg	neg	neg
29	1153091	T3	Pos	neg	neg	neg
30	1166296	T3	neg	neg	neg	neg
31	1175686	T3	neg	neg	neg	neg
32	1215478	T3	neg	neg	neg	neg
33	1217671	T3	neg	neg	neg	neg
34	1248466	T3	neg	neg	neg	neg
35	1398484	T3	neg	neg	neg	neg
36	1432202	T3	neg	neg	neg	neg
37	1454038	T3	neg	neg	neg	neg
38	1519499	T3	neg	neg	neg	neg
39	1534001	T3	neg	neg	neg	neg
40	1556291	T3	neg	neg	neg	neg
41	1562083	T3	neg	neg	neg	neg
42	1566039	T3	neg	neg	neg	neg
43	1643200	T3	neg	neg	neg	neg
44	1668802	T3	neg	neg	Pos	neg

Día antes: Coating ELISA NF155, CASPR1, CNTN1, NF140

[CASPR1]i = 0,789 mg/ml, [NF155]i = 0,20 mg/ml, [CNTN1]i = 0,25 mg/ml,[NF140]i = 0,25 mg/ml

Buffer coating: carbonate-bicarbonate (100 ml agua destilada + 1 pastilla C3041 Sigma)

• CASPR1: 48 pozos []f = 5 ug/ml: 2,5 ml buffer +   15,8 ul
• NF155: 48 pozos []f = 1 ug/ml: 2,5 ml buffer +   12,5 ul
• CNTN1: 48 pozos  []f = 1 ug/ml: 2,5 ml buffer +   10 ul
• NF140: 48 pozos []f = 5 ug/ml: 2,5 ml buffer + 50 ul

Protocolo:

• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% à 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Diluir los  sueros:
  • Screening:  diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
• Incubar con los sueros 1h
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 45min con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-620 nm

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	Cneg	25	29	33	37	41	Cneg	25	29	33	37	41
Bblanc	Cneg	25	29	33	37	41	Cneg	25	29	33	37	41
C prot	Cpos	26	30	34	38	42	Cpos	26	30	34	38	42
Dblanc	Cpos	26	30	34	38	42	Cpos	26	30	34	38	42
E prot	23	27	31	35	39	43	23	27	31	35	39	43
F blanc	23	27	31	35	39	43	23	27	31	35	39	43
G prot	24	28	32	36	40	44	24	28	32	36	40	44
Hblanc	24	28	32	36	40	44	24	28	32	36	40	44

NF140

NF155

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	Cneg	25	29	33	37	41	Cneg	25	29	33	37	41
Bblanc	Cneg	25	29	33	37	41	Cneg	25	29	33	37	41
C prot	Cpos	26	30	34	38	42	Cpos	26	30	34	38	42
Dblanc	Cpos	26	30	34	38	42	Cpos	26	30	34	38	42
E prot	23	27	31	35	39	43	23	27	31	35	39	43
F blanc	23	27	31	35	39	43	23	27	31	35	39	43
G prot	24	28	32	36	40	44	24	28	32	36	40	44
Hblanc	24	28	32	36	40	44	24	28	32	36	40	44

CNTN1

CASPR1

Resultado:

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,203	0,204	0,462	0,191	0,229	0,202	0,256	0,244	0,269	0,245	0,302	0,382
Bblanc	0,239	0,187	0,199	0,186	0,2	0,192	0,277	0,222	0,232	0,216	0,308	0,266
C prot	0,377	0,199	0,211	0,196	0,219	0,267	1,25	0,201	0,22	0,276	0,24	0,368
Dblanc	0,295	0,163	0,2	0,253	0,196	0,329	0,357	0,204	0,227	0,28	0,247	0,493
E prot	0,224	0,246	0,195	0,222	0,216	0,232	0,322	0,238	0,222	0,276	0,287	0,344
F blanc	0,27	0,219	0,181	0,203	0,231	0,252	0,343	0,213	0,221	0,283	0,33	0,399
G prot	0,228	0,195	0,213	0,233	0,245	0,273	0,301	0,26	0,257	0,255	0,364	0,297
Hblanc	0,311	0,206	0,183	0,29	0,199	0,393	0,392	0,266	0,264	0,351	0,283	0,618

NF140 (no hay Cpos)

NF155

 

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,163	0,145	0,16	0,147	0,175	0,145	0,164	0,141	0,157	0,177	0,16	0,165
Bblanc	0,163	0,123	0,141	0,124	0,141	0,125	0,177	0,141	0,146	0,164	0,14	0,166
C prot	1,441	0,11	0,137	0,136	0,136	0,232	0,291	0,1	0,149	0,163	0,127	0,176
Dblanc	0,131	0,097	0,103	0,145	0,126	0,25	0,22	0,129	0,131	0,205	0,125	0,27
E prot	0,152	0,118	0,12	0,135	0,146	0,148	0,218	0,12	0,122	0,158	0,132	0,189
F blanc	0,162	0,104	0,101	0,139	0,14	0,145	0,187	0,138	0,117	0,201	0,138	0,179
G prot	0,197	0,104	0,107	0,135	0,139	0,552	0,18	0,141	0,161	0,181	0,168	0,247
Hblanc	0,164	0,099	0,105	0,205	0,118	0,261	0,221	0,143	0,136	0,247	0,131	0,314

CNTN1

CASPR1 (no hay CPos)