2022.07.22: ELISA NF140, NF155, CASPR1, CNTN1 (screening EM vacunas)

Objetivo: testar las muestras del estudio “Efficacy and neurological adverse effects of COVID-19 vaccination in patients immunocompromised for multiple sclerosis“

Muestras: (22 muestras del estudio EM vacunas de H.Santpau, Cpos y Cneg)

			Resultado NF140	Resultado NF155	Resultado CNTN1	Resultado CASPR1
1	98722	T3	neg	neg	neg	neg
2	111955	T3	neg	neg	neg	neg
3	147303	T3	neg	neg	neg	neg
4	190943	T3	neg	neg	neg	neg
5	219804	T3	neg	neg	neg	neg
6	266178	T3	neg	neg	neg	Pos
7	304320	T3	neg	Pos	neg	neg
8	344185	T3	neg	neg	neg	neg
9	422044	T3	neg	neg	neg	neg
10	461265	T3	neg	neg	neg	neg
11	472720	T3	neg	neg	neg	neg
12	493713	T3	neg	neg	neg	Pos
13	505343	T3	neg	neg	neg	neg
14	591615	T3	neg	neg	neg	neg
15	597217	T3	neg	neg	neg	neg
16	631193	T3	neg	neg	neg	neg
17	814329	T3	neg	neg	neg	neg
18	901936	T3	neg	neg	neg	Pos
19	927164	T3	neg	neg	neg	neg
20	950931	T3	neg	neg	neg	neg
21	1004410	T3	neg	neg	neg	neg
22	1021881	T3	neg	neg	neg	neg

Día antes: Coating ELISA NF155, CASPR1, CNTN1, NF140

[CASPR1]i = 0,789 mg/ml, [NF155]i = 0,20 mg/ml, [CNTN1]i = 0,25 mg/ml,[NF140]i = 0,25 mg/ml

Buffer coating: carbonate-bicarbonate (100 ml agua destilada + 1 pastilla C3041 Sigma)

• CASPR1: 48 pozos []f = 5 ug/ml: 2,5 ml buffer +   15,8 ul
• NF155: 48 pozos []f = 1 ug/ml: 2,5 ml buffer +   12,5 ul
• CNTN1: 48 pozos  []f = 1 ug/ml: 2,5 ml buffer +   10 ul
• NF140: 48 pozos []f = 5 ug/ml: 2,5 ml buffer + 50 ul

Protocolo:

• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% à 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Diluir los  sueros:
  • Screening:  diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
• Incubar con los sueros 1h
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 45min con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-620 nm

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	Cneg	3	7	11	15	19	Cneg	3	7	11	15	19
Bblanc	Cneg	3	7	11	15	19	Cneg	3	7	11	15	19
C prot	Cpos	4	8	12	16	20	Cpos	4	8	12	16	20
Dblanc	Cpos	4	8	12	16	20	Cpos	4	8	12	16	20
E prot	1	5	9	13	17	21	1	5	9	13	17	21
F blanc	1	5	9	13	17	21	1	5	9	13	17	21
G prot	2	6	10	14	18	22	2	6	10	14	18	22
Hblanc	2	6	10	14	18	22	2	6	10	14	18	22

NF140

NF155

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	Cneg	3	7	11	15	19	Cneg	3	7	11	15	19
Bblanc	Cneg	3	7	11	15	19	Cneg	3	7	11	15	19
C prot	Cpos	4	8	12	16	20	Cpos	4	8	12	16	20
Dblanc	Cpos	4	8	12	16	20	Cpos	4	8	12	16	20
E prot	1	5	9	13	17	21	1	5	9	13	17	21
F blanc	1	5	9	13	17	21	1	5	9	13	17	21
G prot	2	6	10	14	18	22	2	6	10	14	18	22
Hblanc	2	6	10	14	18	22	2	6	10	14	18	22

CNTN1

CASPR1

Resultado:

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,148	0,142	0,143	0,185	0,116	0,119	0,177	0,139	0,401	0,235	0,134	0,156
Bblanc	0,214	0,118	0,136	0,108	0,094	0,109	0,199	0,125	0,144	0,187	0,11	0,131
C prot	1,085	0,142	0,118	0,128	0,127	0,213	1,268	0,243	0,103	0,135	0,166	0,306
Dblanc	0,165	0,196	0,095	0,115	0,124	0,147	0,272	0,247	0,1	0,124	0,156	0,176
E prot	0,133	0,123	0,111	0,12	0,131	0,116	0,248	0,141	0,106	0,142	0,192	0,131
F blanc	0,149	0,125	0,107	0,107	0,114	0,1	0,167	0,118	0,115	0,109	0,134	0,113
G prot	0,173	0,119	0,163	0,113	0,114	0,136	0,165	0,118	0,166	0,108	0,113	0,192
Hblanc	0,16	0,115	0,164	0,087	0,086	0,142	0,146	0,097	0,166	0,103	0,112	0,165

NF140

NF155

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,136	0,116	0,14	0,155	0,106	0,121	0,116	0,1	0,134	0,115	0,097	0,107
Bblanc	0,179	0,111	0,142	0,12	0,095	0,105	0,168	0,1	0,129	0,126	0,087	0,141
C prot	1,412	0,165	0,115	0,17	0,13	0,15	1,464	0,112	0,107	0,258	0,139	0,162
Dblanc	0,189	0,219	0,105	0,115	0,141	0,143	0,162	0,129	0,093	0,128	0,122	0,167
E prot	0,144	0,15	0,122	0,115	0,127	0,107	0,103	0,126	0,12	0,119	0,123	0,145
F blanc	0,154	0,124	0,111	0,117	0,106	0,1	0,144	0,127	0,125	0,109	0,11	0,131
G prot	0,161	0,108	0,131	0,096	0,093	0,136	0,163	0,309	0,118	0,089	0,365	0,13
Hblanc	0,222	0,108	0,169	0,093	0,082	0,157	0,176	0,161	0,132	0,105	0,097	0,131

CNTN1

CASPR1