Se analizan por neuronas de GDRs de rata por IgM (suero 1/40) y/o IgG (1/150)algunas de las muestras de neuropatías paraneoplásicas del Hospital Clínic, algunos controles, algunas muestras de SGB con Zika y otros pacientes de la unidad.
PACIENTES
| IgG | IgM | ||
|---|---|---|---|
| 1 | Ramon Vall-Llobera (16-021) | 1 | CT AIDA |
| 2 | Jacinta Carrasco Gimeno (173-11) | 2 | CT XAVI |
| 3 | ZN001A | 3 | AMC (15-107) |
| 4 | ZN005A | 4 | Carmen Seguí (200-12) |
| 5 | ZN008A | 5 | CODOU PEREDA (muestra Laura inmuno) |
| 6 | ZN011A | 6 | Ramon Vall-Llobera (16-021) |
| 7 | EBC (CIDP) | ||
| 8 | Jacinta Carrasco Gimeno (173-11) | ||
| 9 | ZN001A | ||
| 10 | ZN005A | ||
| 11 | ZN008A | ||
| 12 | ZN011A |
PROTOCOLO
PRIMARIO:
- Sacar 300ul de medio del propio cultivo y añadirle 2ul (IgG) o 7,5 (IgM) de suero del paciente en cada uno de los pocillos de placa de 12 donde haremos la inmuno. Mezclar bien con pipeta procurando no hacer espuma y colocar el cubre en el fondo del pocillo de una placa de 12 pocillos vigilando que quede bien cubierto. Incubar 1h a 37ºC (estufa).
FIJADO:
- Vaciar el pocillo lavar una vez con PBS 1X. Fijar con PFA comercial al 4% (aprox 300ul de PFA/pocillo) 5 min a temperatura ambiente.
- Eliminar el PFA y lavar una vez con PBS 1X.
SEGUNDARIO:
- Eliminar el PBS y añadir 300 mcL de el secundario GAH 488 IgM o IgG 1:1500 en Goat serum al 5%. Incubar 1h a temperatura ambiente.
- Lavar cada cubre con H2O y montarlo sobre un porta con Vectashield.
RESULTADOS
| IgG | IgM | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Ramon Vall-Llobera (16-021) | 1 | 1 | CT AIDA | 1 |
| 2 | Jacinta Carrasco Gimeno (173-11) | 0 | 2 | CT XAVI | 0 |
| 3 | ZN001A | 0 | 3 | AMC (15-107) | 1 |
| 4 | ZN005A | 3 | 4 | Carmen Seguí (200-12) | 0 |
| 5 | ZN008A | 1 | 5 | CODOU PEREDA (muestra Laura inmuno) | 0 |
| 6 | ZN011A | 0 | 6 | Ramon Vall-Llobera (16-021) | 1 |
| 7 | EBC (CIDP) | 2 | |||
| 8 | Jacinta Carrasco Gimeno (173-11) | 0 | |||
| 9 | ZN001A | 1 | |||
| 10 | ZN005A | 3 | |||
| 11 | ZN008A | 2 | |||
| 12 | ZN011A | 1 |
