Se analizan por neuronas de GDRs de rata por IgG algunas de las muestras de neuropatías paraneoplásicas del Hospital Clínic. Para aprovechar todas las células en cultivo, se analizan también otros pacientes de la unidad.
PACIENTES
1 )08-530
2)00-1248
3)90-92
4)04-726
5) 92-38
6) 98-164
7)03-838
8)05-409
9)04-1323
10)16-3512
11)01-203
12)93-94
13)97-506
14)02-616
15)16-135 (Joaquim Cervelló Castellví)
16)16-069 (Ramon Domingo Pardell)
17)16-136 (Encarnación Blasco Luz)
18)16-161 (Fco Morales Melero)
19)16-174 (Dionisio Rodrigo Azcoitia)
20)16-062 (J. Manuel Fernandez Perez)
21)16-033 (Consuelo Ana Llanos)
22)16-129 (M.J Guix Alonso)
23)16-134 (num 119)
24) 16-177 (M. Isabel Ruano Baraza;14/12/16)*
25)16-111 (Ares Fabregat Prats)
26)16-123 (Anselmo Fernandez Roncel)
27)16-121 (Celia Maria Fabri Lagüens)**
28)15-211 (Joaquim Torres Sagol)
29)MRE (Mariano Roldan Ecija)
30)15-467 (Isabel Ruano Baraza; pax Jordi 28/4/15)*
31)15-208 (Eulalia Balmaseda Carrion)
32)15-024 (Holanda18)
33)15-040 (Holanda 34)
34)HVH1
35) CT – EDU
*Son la misma muestra a tiempos diferentes.
** en realidad se quería analizar la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera), pero se cogió la muestra 16-121 por error. En futuros experimentos se analizará la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera)
PROTOCOLO
PRIMARIO:
- Sacar 300ul de medio del propio cultivo y añadirle 2ul de suero del paciente en cada uno de los pocillos de placa de 12 donde haremos la inmuno. Mezclar bien con pipeta procurando no hacer espuma y colocar el cubre en el fondo del pocillo de una placa de 12 pocillos vigilando que quede bien cubierto. Incubar 1h a 37ºC (estufa).
FIJADO:
- Vaciar el pocillo lavar una vez con PBS 1X. Fijar con PFA comercial al 4% (aprox 300ul de PFA/pocillo) 5 min a temperatura ambiente.
- Eliminar el PFA y lavar una vez con PBS 1X.
SEGUNDARIO:
- Eliminar el PBS y añadir 300 mcL de el secundario GAH 488 IgG 1:1500 en Goat serum al 5%. Incubar 1h a temperatura ambiente.
- Lavar cada cubre con H2O y montarlo sobre un porta con Vectashield.
RESULTADOS
Todos negativos, excepto las muestras indicadas (+) a continuación:
1 )08-530
2)00-1248: + (foto)
3)90-92
4)04-726: marca cuerpo neuronal moteado (foto)
5) 92-38: marca cuerpo neuronal moteado (foto)
6) 98-164
7)03-838: ++ (marca axón y cuerpo) (foto)
8)05-409
9)04-1323
10)16-3512
11)01-203: + (foto)
12)93-94
13)97-506:+ (foto)
14)02-616:+ (foto)
15)16-135
16)16-069
17)16-136
18)16-161
19)16-174
20)16-062
21)16-033
22)16-129
23)16-134: +++ (foto)
24) 16-177*:+ (foto)
25)16-111
26)16-123
27)16-121:+ (foto)**
28)15-211:+ (foto)
29)MRE: marca cuerpo neuronal moteado (foto) (candidato a IP)
30)15-467*
31)15-208
32)24:+ (foto)
33)40: ++ (marca axón y cuerpo) (foto)
34)HVH1:++++
35) CT – EDU
*Son la misma muestra a tiempos diferentes. Interesantemente, la pax no marca en la primera muestra (con tumor) pero sí en la segunda (tratada). En lo que se refiere a la neuropatía la paciente ha mejorado según el Dr. Díaz.
** en realidad se quería analizar la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera), pero se cogió la muestra 16-121 por error. En futuros experimentos se analizará la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera)
