Se analizan por neuronas de GDRs de rata por IgG algunas de las muestras de neuropatías paraneoplásicas del Hospital Clínic.
PACIENTES
1 )95-43
2)94-292
3)97-543
4)93-40
5) 92-147
6) 94-55
7)93-38
8)92-133
9)01-848
10)00-1289
11)98-14
12)03-1167
13)04-2
14)13-1127
15)15-2420
16)15-1131
17)11-1167
18)00-307
19)15-2373
20)08-530
21)ctrl edu
22)HVH1
23)LAC
24) MRVM
PROTOCOLO
PRIMARIO:
- Sacar 300ul de medio del propio cultivo y añadirle 2ul de suero del paciente en cada uno de los pocillos de placa de 12 donde haremos la inmuno. Mezclar bien con pipeta procurando no hacer espuma y colocar el cubre en el fondo del pocillo de una placa de 12 pocillos vigilando que quede bien cubierto. Incubar 1h a 37ºC (estufa).
FIJADO:
- Vaciar el pocillo lavar una vez con PBS 1X. Fijar con PFA comercial al 4% (aprox 300ul de PFA/pocillo) 5 min a temperatura ambiente.
- Eliminar el PFA y lavar una vez con PBS 1X.
SEGUNDARIO:
- Eliminar el PBS y añadir 300 mcL de el secundario GAH 488 IgG 1:1500 en Goat serum al 5%. Incubar 1h a temperatura ambiente.
- Lavar cada cubre con H2O y montarlo sobre un porta con Vectashield.
RESULTADOS
Todos negativos, excepto las muestras indicadas (+) a continuación:
1 )95-43
2)94-292
3)97-543
4)93-40
5) 92-147
6) 94-55
7)93-38: + (pasar por Schwann)
8)92-133: +
9)01-848
10)00-1289
11)98-14
12)03-1167
13)04-2
14)13-1127: +
15)15-2420: +
16)15-1131: ++
17)11-1167
18)00-307
19)15-2373
20)08-530:++ (pasar por Schwann y neuronas)
21)ctrl edu
22)HVH1: ++++
23)LAC
24) MRVM: +
