Se analizan por neuronas de GDRs de rata por IgM algunas de las muestras de neuropatías paraneoplásicas del Hospital Clínic. Para aprovechar todas las células en cultivo, se analizan también otros pacientes de la unidad.
PACIENTES
1 )95-43
2)94-292
3)97-543
4)93-40
5) 92-147
6) 94-55
7)93-38
8)92-133
9)01-848
10)00-1289
11)98-14
12)03-1167
13)04-2
14)13-1127
15)15-2420
16)15-1131
17)11-1167
18)00-307
19)15-2373
20 )08-530
21)00-1248
22)90-92
23)04-726
24) 92-38
25) 98-164
26)03-838
27)05-409
28)04-1323
29)16-3512
30)01-203
31)93-94
32)97-506
33)02-616
34)16-135 (Joaquim Cervelló Castellví)
35)16-069 (Ramon Domingo Pardell)
36)16-136 (Encarnación Blasco Luz)
37)16-161 (Fco Morales Melero)
38)16-174 (Dionisio Rodrigo Azcoitia)
39)16-062 (J. Manuel Fernandez Perez)
40)16-033 (Consuelo Ana Llanos)
41)16-129 (M.J Guix Alonso)
42)16-134 (num 119)
43) 16-177 (M. Isabel Ruano Baraza;14/12/16)*
44)16-111 (Ares Fabregat Prats)
45)16-123 (Anselmo Fernandez Roncel)
46)16-121 (Celia Maria Fabri Lagüens)**
47)15-467 (Isabel Ruano Baraza; pax Jordi 28/4/15)*
48)15-211(Joaquim Torres Sagol)
49)MRE (Mariano Roldan Ecija)
50)15-208 (Eulalia Balmaseda Carrion)
51)15-024 (Holanda18)
52)15-040 (Holanda 34)
53)EFB (Encarnación Fernandez Blanco)
54) CT – EDU
*Son la misma muestra a tiempos diferentes.
** en realidad se quería analizar la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera), pero se cogió la muestra 16-121 por error. En futuros experimentos se analizará la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera)
PROTOCOLO
PRIMARIO:
- Sacar 300ul de medio del propio cultivo y añadirle 2ul de suero del paciente en cada uno de los pocillos de placa de 12 donde haremos la inmuno. Mezclar bien con pipeta procurando no hacer espuma y colocar el cubre en el fondo del pocillo de una placa de 12 pocillos vigilando que quede bien cubierto. Incubar 1h a 37ºC (estufa).
FIJADO:
- Vaciar el pocillo lavar una vez con PBS 1X. Fijar con PFA comercial al 4% (aprox 300ul de PFA/pocillo) 5 min a temperatura ambiente.
- Eliminar el PFA y lavar una vez con PBS 1X.
SEGUNDARIO:
- Eliminar el PBS y añadir 300 mcL de el secundario GAH 488 IgM 1:1500 en Goat serum al 5%. Incubar 1h a temperatura ambiente.
- Lavar cada cubre con H2O y montarlo sobre un porta con Vectashield.
RESULTADOS
Todos negativos, excepto las muestras indicadas (+) a continuación:
1 )95-43
2)94-292
3)97-543
4)93-40
5) 92-147
6) 94-55
7)93-38
8)92-133
9)01-848
10)00-1289: + (foto)
11)98-14: marca cuerpo neuronal moteado
12)03-1167
13)04-2
14)13-1127
15)15-2420
16)15-1131
17)11-1167
18)00-307
19)15-2373
20 )08-530:+ (foto)
21)00-1248:+ (foto)
22)90-92
23)04-726
24) 92-38
25) 98-164
26)03-838
27)05-409
28)04-1323
29)16-3512:+ (foto)
30)01-203:+ (foto)
31)93-94
32)97-506
33)02-616
34)16-135 (Joaquim Cervelló Castellví)
35)16-069 (Ramon Domingo Pardell)
36)16-136 (Encarnación Blasco Luz)
37)16-161 (Fco Morales Melero)
38)16-174 (Dionisio Rodrigo Azcoitia)
39)16-062 (J. Manuel Fernandez Perez)
40)16-033 (Consuelo Ana Llanos)
41)16-129 (M.J Guix Alonso):+ (foto)
42)16-134 (num 119)
43) 16-177 (M. Isabel Ruano Baraza;14/12/16)*
44)16-111 (Ares Fabregat Prats)
45)16-123 (Anselmo Fernandez Roncel)
46)16-121 (Celia Maria Fabri Lagüens)**
47)15-467 (Isabel Ruano Baraza; pax Jordi 28/4/15)*
48)15-211(Joaquim Torres Sagol)
49)MRE (Mariano Roldan Ecija): marca cuerpo neuronal moteado
50)15-208 (Eulalia Balmaseda Carrion):+ (foto)
51)15-024 (Holanda18)
52)15-040 (Holanda 34)
53)EFB (Encarnación Fernandez Blanco):marca cuerpo neuronal moteado
54) CT – EDU
*Son la misma muestra a tiempos diferentes.
** en realidad se quería analizar la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera), pero se cogió la muestra 16-121 por error. En futuros experimentos se analizará la muestra 16-021 (Ramon Vall-Llobera)
Importante: En futuros ensayos por IgM, se pasarán los sueros positivos a 1/40.
