24.03.15:ICQ Perfil nodales/paranodales BD + ELISA CASPR1-NF155

ICQ Perfil nodales/paranodales BD

6 culture slides transfectados el dia 06/03/24

Muestras:

• CP
• 24-2-382 à BOX 370
• 24-2-383 à BOX 370
• 24-2-388 à BOX 370
• 24-2-389 à BOX 370
• 24-2-390 à BOX 370
• 24-2-391 à BOX 370
• 24-2-392 à BOX 370
• 24-2-393 à BOX 370
• 24-2-394 à BOX 370
• 24-2-458 à BOX 373
• 24-2-459 à BOX 373

Protocolo:

• Incubar 1hora a T. ambiente los sueros diluidos a 1:100 con solución de bloqueo.
• Lavar 3 veces con PBS 1X.
• Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac primario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
• Lavar 3 veces con PBS 1X
• Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac secundario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
  • CNTN1: RAG488 + RAH594 a Rabbit Serum 1/40
  • NF155, NF140, NF186: GAC488 + GAH594 a Goat Serum 5%.
  • CASPR1: GAR 488 + GAH594
• Lavar 3 veces con PBS 1X
• Poner medio de montaje “fluoromount” i cobrir con un cubreobjetos.
• Analizar resultados al microscopio de fluorescencia.

Resultado:

		Resultado
Muestra	BOX	CNTN1	NF140	NF155	NF186
Control Positivo	Controls	+++	+++	++	++
24-2-382	BOX 370	–	–	–	–
24-2-383	BOX 370	–	–	–	–
24-2-388	BOX 370	–	–	–	–
24-2-389	BOX 370	–	–	–	–
24-2-390	BOX 370	–	–	–	–
24-2-391	BOX 370	–	–	–	–
24-2-392	BOX 370	x	x	x	x
24-2-393	BOX 370	–	–	–	–
24-2-394	BOX 370	–	–	–	–
24-2-458	BOX 373	–	–	–	–
24-2-459	BOX 373	–	–	–	–

ELISA CASPR1-NF155

Muestras

• Muestra NF155
  • 24-2-384, BOX 370

• Muestras CASPR1
  • 24-2-458 à BOX 373
    • 24-2-459 à BOX 373

Plantila placa

	1	2
A prot	Cneg	Cneg
B blanc	Cneg	Cneg
C prot	Cpos CASPR1	Cpos NF155
D blanc	Cpos CASPR1	Cpos NF155
E prot	24-2-458	24-2-384
F blanc	24-2-458	24-2-384
G prot	24-2-459
Hblanc	24-2-459

Protocolo

• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Diluir los  sueros:
  • Screening:  diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
• Incubar con los sueros 1h a RT
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Ac secundarios:
  • Screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-570 nm

Resultado

	1	2
A	0,089	0,188
B	0,12	0,229
C	1,267	0,981
D	0,106	0,231
E	0,094	0,329
F	0,102	0,125
G	0,129	0
H	0,136	0