2024.02.28: ELISA NF-140 + ICQ Perfil nodales/paranodales BD

ELISA NF-140

Muestras (probar 2 controles positivos distintos para confirmar si el problema es de la placa)

• C. negativo
• C positivo 1
• C positivo 2
• 24-02-0357
• 24-02-0360

Protocolo:

• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Diluir los  sueros:
  • Screening:  diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
• Incubar con los sueros 1h a RT
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Ac secundarios:
  • Screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-570 nm

Resultado

ICQ Perfil nodales/paranodales BD

Muestras

• CP
• 24-02-0368
• 24-02-0369
• 24-02-0370

Protocolo

• Incubar 1hora a T. ambiente los sueros diluidos a 1:100 con solución de bloqueo.
• Lavar 3 veces con PBS 1X.
• Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac primario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
• Lavar 3 veces con PBS 1X
• Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac secundario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
  • CNTN1: RAG488 + RAH594 a Rabbit Serum 1/40
  • NF155, NF140, NF186: GAC488 + GAH594 a Goat Serum 5%.
  • CASPR1: GAR 488 + GAH594
• Lavar 3 veces con PBS 1X
• Poner medio de montaje “fluoromount” i cobrir con un cubreobjetos.
• Analizar resultados al microscopio de fluorescencia.

Resultado