Coating células + transfección Culture slides
11 culture slides perfil anti-nodales/paranodales y 1 culture slide CNTN1
Protocolo:
- Preparar mezclas transfección cada culture slide (8 pozos)
- 2 ug DNA + 40 ul Optimem
- 3,2 ul lipofectamina + 40 ul Optimem
- Juntar y dejar reposar mínimo 5 minutos.
- Poner 300 ul de medio HEK a cada pozo.
- Poner 120.000 cels (HEK293) a cada pozo.
- Poner 10 ul de mezcla de transfección a cada pozo.
ICQ Perfil nodales/paranodales BD
CNTN1, NF140, NF155, NF186 (cels fijadas, suero 1/100)
1 culture slide transfectado 30/01/2024 + 2 culture slides transfectados el 17/01/23
Muestras:
- Control Positivo
- 24-2-0180 (BOX 364-A6/A7) à Muestra de Birmingham
- 24-2-0222 (BOX 365-B6,B7) à 001-0001
- 24-2-0224 (BOX 365-C1,C2) à 001-0002
- 24-2-0229 (BOX 365-D2,D3) à 001-0004
- 24-2-0232 (BOX 365-D8,D9) à 001-0005
Protocolo:
- Incubar 1hora a T. ambiente los sueros diluidos a 1:100 con solución de bloqueo.
- Lavar 3 veces con PBS 1X.
- Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac primario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
- Lavar 3 veces con PBS 1X
- Incubar 1 hora con 30-40uL del Ac secundario diluido a 1:500 con solución de bloqueo.
- CNTN1: RAG488 + RAH594 a Rabbit Serum 1/40
- NF155, NF140, NF186: GAC488 + GAH594 a Goat Serum 5%.
- CASPR1: GAR 488 + GAH594
- Lavar 3 veces con PBS 1X
- Poner medio de montaje “fluoromount” i cobrir con un cubreobjetos.
- Analizar resultados al microscopio de fluorescencia.
Resultado:
| Resultado | |||||
| Muestra | BOX | CNTN1 | NF140 | NF155 | NF186 |
| Control Positivo | Controls | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 24-2-0180 | BOX 364 | – | – | – | – |
| 24-2-0222 | BOX 365 | – | – | – | – |
| 24-2-0224 | BOX 365 | – | – | +? | – |
| 24-2-0229 | BOX 365 | – | – | – | – |
| 24-2-0232 | BOX 365 | – | – | – | – |
