2024.02.15- ELISA CNTN1 – Muestras seguimiento

Muestras:

1. 2.1 titulación –>22-2-854
2. 2.4 titulación –> 24-2-338
3. 32.1 titulación –> 23-2-942
4. 32.3 titulación –> 24-2-341
5. 2.4 subclases –> 24-2-338

Muestras:

1. 2.1 titulación –>22-2-854
2. 2.4 titulación –> 24-2-338
3. 32.1 titulación –> 23-2-942
4. 32.3 titulación –> 24-2-341
5. 2.4 subclases –> 24-2-338

Protocolo:

• Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente). Calculamos aprox 40 ml de leche + 2g de leche.
• Titulación sueros: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
• Incubar con los sueros 1h
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 45min con anticuerpo secundario:
  • Titulaciones: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 100 ul/pozo
  • Subclases: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 100 ul/pozo
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB –> 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
• Leer a 450-570 nm

Resultados:

1. 2.1 –>1/8100
2. 2.4 –>1/8100
3. 32.1 –> 1/24300
4. 32.3 –> 1/900
5. 2.4 –> IgG4>>IgG2