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2024.02.07- ELISA CNTN1-subclases / titulaciones

Muestras: Placa 1:

  1. C4.1 subclases
  2. C29.1 subclases
  3. C33.1 subclases
  4. C34.1 subclases
  5. C20.1 – C4517/19 – subclases
  6. C21.1- C4354/19- subclases
  7. C23.1 -C653/16- subclases
  8. C24.1 – C6638/21subclases
  9. C18.1- C1664/1- totales
  10. C22.1 – C7006/18 – totales

Placa 2:

  1. C25.1- C7665/21- subclases
  2. C26.1- C876/19- subclases
  3. C29.1 titulación
  4. C33.1 titulación
  5. C34.1 titulación
  6. C20.1 – C4517/19- titulación
  7. C19.1- C3097/18 – totales

Protocolo:

  • Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
  • Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% – 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente). Calculamos aprox 40 ml de leche + 2g de leche.
  • Titulación sueros: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
  • Incubar con los sueros 1h
  • Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
  • Incubar 45min con anticuerpo secundario:
    • Titulaciones: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
    • Subclases: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
  • Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
  • Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
  • Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
  • Leer a 450-620 nm
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A protC4.1 IgG1C29.1  IgG1C33.1  IgG1C34.1  IgG1C20.1  IgG1C21.1  IgG1C23.1 IgG1C24.1 IgG1C18.1  
B blanc         
C protIgG2IgG2IgG2IgG2IgG2IgG2IgG2IgG2C22.1
D blanc         
E protIgG3IgG3IgG3IgG3IgG3IgG3IgG3IgG3C pos
F blanc         
G protIgG4IgG4IgG4IgG4IgG4IgG4IgG4IgG4C neg
H blanc         
 123456789
A prot0,0710,0870,2810,0810,0970,3960,1220,0650,478
B blanc0,0380,040,0380,0590,0680,1842,0691,3030,805
C prot0,3580,30,1830,5380,4980,7540,4771,2710,853
D blanc0,1280,260,2910,1440,1530,1460,1790,2540,188
E prot0,0550,0570,0360,0680,0920,090,1490,0760,903
F blanc0,0670,0560,0240,0520,080,0720,0520,080,215
G prot1,0320,9690,0341,0821,1211,0391,0640,9940,159
H blanc0,0330,0460,020,0330,0430,0890,1640,0690,23
 123456789
A protC25.1 IgG1C26.1  IgG1C29.1 1/1001/81001/900C34.1 1/1001/81001/900C19.1
B blanc         
C protIgG2IgG21/3001/243001/27001/3001/243001/2700C POS
D blanc         
E protIgG3IgG31/900C33.1 1/1001/81001/900C 20.1 1/1001/8100C neg
F blanc         
G protIgG4IgG41/27001/3001/243001/27001/3001/24300 
H blanc         
 123456789
A prot0,1670,1680,7840,2230,5470,7660,2820,5990,409
B blanc0,0970,1430,4450,2540,3120,3210,3180,2630,504
C prot0,3210,4030,5280,2020,3020,6580,3190,4390,806
D blanc0,2540,270,2160,1850,2760,2270,3070,2870,314
E prot0,1310,080,3490,8190,2180,560,6710,2790,287
F blanc0,1090,130,2290,3470,1910,2470,3330,2370,246
G prot0,9760,9350,2850,6970,2170,3650,7010,2950,267
H blanc0,0930,1110,3030,30,1940,1810,260,2410,278

Resultados Placa 1:

  1. C4.1 — IgG2 << IgG4
  2. C29.1– IgG4
  3. C33.1 — IgG1??
  4. C34.1 — IgG2 << IgG4
  5. C20.1 – C4517/19 — IgG2 << IgG4
  6. C21.1- C4354/19 — IgG1< IgG2 << IgG4
  7. C23.1 -C653/16 — IgG2<< IgG4
  8. C24.1 – C6638/21 — IgG2 = IgG4
  9. C18.1- C1664/1 — REPETIR
  10. C22.1 – C7006/18 — positivo

Placa 2:

  1. C25.1- C7665/21 — IgG2<< IgG4
  2. C26.1- C876/19 — IgG2<< IgG4
  3. C29.1 — 1/900
  4. C33.1 — 1/900
  5. C34.1  — 1/2700
  6. C20.1 – C4517/19 — 1/2700
  7. C19.1- C3097/18 — REPETIR
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Published by Marta Caballero

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