Protocolo ICC (día 88, 23/01/2024): entre cada paso hacer lavados con PBS1x. Sólo hago ICC con un cubre de cada condición (había 2 por cada condición), y añado 1 cubre de médula que se ha crecido sin suero.
- Fijar con PFA4% 20min
- Permeabilizar 10min con metanol -20ºC
- Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 2h RT
- anti–Caspr1 (ab34151) 1/200
- anti-MBP (808401) 1/200
- anti-panNF 1/200
- Incubar con anticuerpos secundarios: GAR594 + GAM488 + GAC647 diluídos 1/500 en Goat serum 5%: 1h RT.
- Montar con Fluoromount
Resultado: prácticamente no hay mielina, no sirve de nada (no están mielinizando como esperaría, así que no hago nada más con este experimento).
