Muestras:
- 23-2-1355: comprobar positividad NF155 y subclases
Protocolo:
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
- En este caso se usa placa bloqueada y congelada el día 22/06/2023
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Diluir los sueros:
- Subclases y screening: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Incubar con los sueros 1h a RT
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Ac secundarios:
- Titulación / screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/2000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% : 100 ul/pozo, 45 min
- Subclases: Incubar con MAH HRP IgG1 o IgG2 o IgG3 o IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1%: 100 ul/pozo, 45 min
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | Cneg | 23-2-1355 IgG1 | ||||||||||
| B blanc | Cneg | 23-2-1355 IgG1 | ||||||||||
| C prot | Cpos NF155 | 23-2-1355 IgG2 | ||||||||||
| D blanc | Cpos NF155 | 23-2-1355 IgG2 | ||||||||||
| E prot | 23-2-1355 IgGtot | 23-2-1355 IgG3 | ||||||||||
| F blanc | 23-2-1355 IgGtot | 23-2-1355 IgG3 | ||||||||||
| G prot | 23-2-1355 IgG4 | |||||||||||
| Hblanc | 23-2-1355 IgG4 |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 0,059 | 0,046 | ||||||||||
| B blanc | 0,043 | 0,042 | ||||||||||
| C prot | 0,256 | 0,144 | ||||||||||
| D blanc | 0,101 | 0,161 | ||||||||||
| E prot | 0,313 | 0,025 | ||||||||||
| F blanc | 0,142 | 0,033 | ||||||||||
| G prot | 0,027 | 0,15 | ||||||||||
| Hblanc | 0 | 0,065 |
Resultado: aunque el ELISA en general ha salido muy bajito (el C+ tiene una OD muy baja), lo damos por bueno por la prisa que hay en entregar los resultados. 23-2-1355: NF155+, Subclase IgG4
