2023.11.24 – ELISA CNTN1- subclases

Muestras:

Placa 1:

C6.1
C7.1
C9.1
C9.2
C9.3
C9.4
C9.5
C14.1
C1.2

Placa 2

C15.1
C17.1
C27.1
C28.1
C28.2
C28.3
C30.1
C31.1
C32.1

Protocolo:

Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% – 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente).
Suero 1/100 en leche
Incubar con los sueros 1h
Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
Incubar 45min con anticuerpo secundario:
- RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS- tween 0’1% à 100 ul/pozo
- IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 1/500 en leche 5% en PBS-tween 0’1% – 100 ul/pozo
Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
Leer a 450/570

A prot

C6.1 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C9.3 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C1.2 IgGT

IgG4

B blanc

C prot

IgG1

C7.1 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C9.4 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C NEG

D blanc

E prot

IgG2

IgG1

C9.1 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C9.5 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

F blanc

G prot

IgG3

IgG2

IgG1

C9.2. IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C 14.1 IgGT

IgG4

IgG3

H blanc

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,774	1,214	0,165	0,339	0,073	0,165	0,098	0,03	0,615	0,122	0,988	0,874
B blanc	0,113	0,052	0,077	0,249	0,049	0,087	0,066	0,032	0,2	0,069	0,186	0,084
C prot	0,052	0,985	1,069	0,073	0,227	0,069	0,062	0,024	0,334	0,637	0,099	0,193
D blanc	0,037	0,177	0,035	0,121	0,125	0,072	0,124	0,051	0,069	0,205	0,079	0,219
E prot	0,156	0,131	1,155	1,077	0,074	0,221	0,079	0,193	0,072	0,509	0,61	0,009
F blanc	0,186	0,063	0,133	0,089	0,084	0,347	0,07	0,196	0,088	0,057	0,243	0,008
G prot	0,101	0,577	0,196	0,714	0,564	0,071	0,241	0,048	1,088	1,229	0,18	0,009
H blanc	0,128	0,219	0,044	0,17	0,119	0,078	0,256	0,064	0,162	0,097	0,041	0,008

A prot

C15.1 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C28.2 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C32.1 IgGT

IgG4

B blanc

C prot

IgG1

C17.1 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C28.3 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C NEG

D blanc

E prot

IgG2

IgG1

C27.1 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

C30.1 IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

F blanc

G prot

IgG3

IgG2

IgG1

C28.1. IgGT

IgG4

IgG3

IgG2

IgG1

31.1 IgGT

IgG4

IgG3

H blanc

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A prot	0,97	0,837	0,065	0,28	0,077	0,944	0,921	0,067	0,403	0,083	1,109	1,251
B blanc	0,215	0,087	0,13	0,288	0,067	0,245	0,087	0,072	0,155	0,076	0,199	0,1
C prot	0,048	0,938	1,09	0,078	0,474	0,1	0,286	0,151	0,104	0,274	0,164	0,26
D blanc	0,057	0,115	0,052	0,047	0,183	0,056	0,254	0,078	0,083	0,352	0,101	0,151
E prot	0,397	0,085	0,899	0,79	0,093	0,396	0,039	0,703	0,091	0,086	0,506	0,008
F blanc	0,296	0,049	0,124	0,074	0,039	0,174	0,053	0,171	0,054	0,078	0,166	0,002
G prot	0,099	0,915	0,118	0,959	1,002	0,04	0,421	0,054	1,024	0,982	0,062	0,004
H blanc	0,075	0,244	0,054	0,146	0,056	0,038	0,42	0,06	0,223	0,067	0,067	0,006

Muestras:

Placa 1:

C6.1 – IgG4
C7.1—IgG2<<IgG4
C9.1 — IgG1<IgG2<< IgG4
C9.2 – IgG2 << IgG4
C9.3 No salen (títulos bajos)
C9.4 No sale (títulos bajos)
C9.5 No sale(títulos bajos)
C14.1 – IgG2 = IgG3 <<IgG4
C1.2 – IgG2 < IgG4

Placa 2

C15.1 – IgG2 << IgG4
C17.1 – IgG2 << IgG4
C27.1—IgG4
C28.1 – IgG2 << IgG4
C28.2 – IgG2 << IgG4
C28.3 – no sale (títulos bajos)
C30.1 – IgG2 << IgG4
C31.1- IgG4
C32.1 – – IgG2 << IgG4

2023.11.24 – ELISA CNTN1- subclases

Published by Marta Caballero

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