2023.10.30: ICC co-cultivos médula (día 53 – rata 07/09/2023)

Objetivo: tratar de ver marcaje en los paranodos con muestras Caspr1+ (ya que en co-cultivos de explantes DRG no lo veo).

Muestras:

1. IgG 136-8
2. IgG 22-2-374
3. IgG 23-2-554
4. IgG 23-2-656
5. Suero 136-8
6. Suero GDP (CIDP15)
7. Suero Cneg 217-32
8. Suero Cneg 217-33

Protocolo cels fijadas:

• Fijar 20min con PFA 4%
• Permeabilizar 10min con metanol -20ºC
• Bloquear con Goat serum 5%: 30min RT
• Incubar con suero 1/100 o IgG 1/10 diluído en Goat serum 5%: 2h a RT
• Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 1h a RT (los pongo juntos)
  •  anti–Caspr1 (ab34151) 1/200
  • anti-MBP (808401) 1/200
• Incubar con anticuerpos secundarios  GAH488 IgG + GAR594 + GAM647 diluídos  1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
• Montar con Fluoromount

Resultado: no se ven los paranodos con los sueros!! Seguir probando