2023.10.27: Cambios medios co-cultivos, neuronas DRG y neuronas médula: rata 27/10/2023

Explantes DRG: 5 placas de 24 wells con 1 cubre de 12mm en cada pozo
- D0 (27/10): Añadir 500 ul de medio NG a cada pozo con cubre:
  - Neurobasal: 48 ml
  - 2% B27: 1 ml
  - 1% Glutamax: 0,5 ml
  - 1% Pen-Str: 0,5 ml
  - 50 ng/ml NGF:25 ul
- D3 (30/10): quito 200ul de medio NG de cada pozo, y añado 400ul de medio NG nuevo
  - *en teoría tendría que cambiar a medio mielinización el día 2 o 3 de noviembre pero no estoy.
- D5 (01/11): quito 300ul de cada pozo y añado 400ul de medio de mielinización NG
  - 50 ml de medio NG
  - 50 ug/ml de ácido ascórbico: 500 ul del stock 5mg/ml (1/100 en el medio)
- D3 (05/10): cambiar mitad del medio de mielinización
- A partir de aquí ir cambiando la mitad del medio de mielinización cada 3 días
Células médula disgregadas (con glía): 3 placas 60cc con 26 cubres 9mm:
- Tratadas como explantes de DR
Neuronas DRG: 1 placa 60 cc con 26 cubres 9mm
- D0 (27/10) : Añadir medio NG
- D3 (30/10): este día debería cambiar la mitad de medio por medio NGF, pero no lo hago porque veo que las células están fatal.
  - 50 ml de medio NG
  - 10 µl de 5-fluorodesoxiuridina (1)
  - 10 µl de uridina (2)
  - 5 µl de AraC 10 mM
- Finalmente tiro las células porque 2 semanas más tarde no había crecido nada: no disgregar nunca más las DRG con GentleMACS!!

Published by Cinta Lleixa