2023.10.04: ICC co-cultivos DRG -1- (día 47 – rata 07/09/2023)

Muestras:

1. 136-8 (coger CIDP78 cajas -80ºC)
2. 22-2-374
3. 23-2-656
4. 23-2-554
5. Cneg 21-2-1608

Protocolo cels fijadas:

• Fijar 20min con PFA 4%
• Permeabilizar 10min con metanol -20ºC
• Bloquear con Goat serum 5%: 30min RT
• Incubar con suero 1/50 diluído en Goat serum 5%: 2h a RT
• Incubar con anticuerpos primarios diluídos en Goat serum 5%: 2h a RT (los pongo juntos)
  •  anti–Caspr1 (ab34151) 1/200
  • anti-MBP (808401) 1/200
• Incubar con anticuerpos secundarios  GAH488 IgG + GAR594 + GAM647 diluídos  1/500 en Goat serum 5%: 1h RT
• Montar con Fluoromount

Resultado: las ICC han salido muy bien (mielina y Caspr1), pero ninguno de los pacientes Caspr1+ marca los paranodos… (la 136-8 puede parecer un poco).

La muestra 136-8 marca bastante los axones y la mielina (o las cels Schwann mielinizantes).