2023.10.17: IHC Monkey peripheral nerve (BD)

Muestras:

1. 23-2-1083 (IgG y IgM)
2. Cneg (IgG y IgM)
3. GDP1 (CIDP15) IgG – doble MBP*
4. MRVM (CIDP78) IgG – doble LIF (invitrogen)

*Quería hacer doble con el anticuerpo anti-LIF de abcam pero no quedaba

Protocolo: Monkey sciatic nerve slides (44685, Biosystems, Palex)

• Bloquear 30 min – 1h con Goat serum 5%
• Incubar 1h con 40 ul de suero diluído 1/10 en Goat serum 5% (4 ul de suero + 36 ul de bloqueo)
• 3 lavados con PBS1x
• Pozos 3-4: incubar con anticuerpo primario:
  • Pozo 3: anti-MBP (808401, Biolegend) 1/20 (mouse)
  • Pozo 4: anti-LIF (PA579600, Invitrogen) 1/20 (rabbit)
• 3 lavados con PBS1x
• Incubar 45min con 30-40 ul de Ac.secundarios (diluídos 1/500 en Goat serum 5%):
  • Pozos 1-2: GAH monkey absorbed IgG 488 + GAH IgM 594
  • Pozos 3-4: GAH monkey absorbed IgG 488 + GAR 594
• 3 lavados con PBS1x
• Montar con fluoromount

Resultado:

1. 23-2-1083: negativo (IgG, IgM)
2. Cneg: negativo (IgG, IgM)
3. GDP1 (CIDP15) IgG – doble MBP: el suero marca la mielina. El MBP tiene un marcaje difuso horrible
4. MRVM (CIDP78) IgG – doble LIF (invitrogen): el suero marca la mielina. El LIF no marca nada (sólo unas estructuras dentro de los vasos, que no colocalizan con el suero)