PROTOCOLO habitual de trasfección en cubres. Dejo 24h de trasnfección.
DNA/placa (25 cubres)
8 ug MRGPRD (0.815ug/ul) –> 9.8ul
8ug GPR57 (0.891 ug/ul) –> 9ul
Inmuno en células vivas: depues fijar con PFA4% 10 min, bloqueo con goat 5% (30 min), secundarios GAH488 (IgM e IgG para MRGPRD, IgG para GPR57)
MUESTRAS A TESTAR
- MRGPRD (IgM + IgG): 22-2-0846, 22, 23, 26, 56, 59, 86, 87, 91, 100, control negativo –> para ello uso suero total, para IgM dilución 1/50, para IgG 1/100
- GPR57 (IgG): 6, 23, 56, 59, 77, 86, 87, 92, 94, 100, control negativo –> para ello uso las muestras de IgG purificadas sobrantes, las diluyo 1/10 ya que previamente estaban diluidas 1/10 para la purificación
RESULTADOS:
No veo marcaje que parezca postivo, pero la mayoría de las muestras (incluído control negativo) marcan algunas células, probablemente inespecífico
