2023.10.06: IHC teasing nervio ciático rata (sueros Caspr1+)

Muestras:

1. IgG 136-8 1/10 – doble panNF
2. Suero 136-8 1/100 – doble panNF
3. IgG 23-2-656 1/10 – doble panNF
4. Suero 23-2-656 1/100 – doble panNF
5. IgG 23-2-374 – doble CASPR1
6. Suero CNTN1+ – doble CASPR1

Protocolo: (entre cada paso hacer 3 lavados con PBS1x)

• Fijar con acetona (-20ºC) 10 min
• Separar los dos grupos de tejido con Dakopen
• Bloquear 1h RT con Goat serum 5% + 0’1% tritón
• Incubar con suero/IgG diluído en Goat serum 5% + 0’1% tritón (según diluciones anteriores) 1h RT
• Incubar con ac comercial diluídos en Goat serum 5% + 0’1% tritón  1h RT
  • anti-panNF 1/200
  • anti-CASPR1 ab133634 1/20
• Incubar con ac secundarios diluídos 1/500 en Goat serum 5% + 0’1% tritón  1h RT
  • 1-4) GAH594 IgG + GAC488
  • 5-6) GAH594 IgG + GAR488
  • Montar con Fluoromount

Resultado: se ven muy bien los paranodos con todas las muestras, incluso con la muestra 22-2-374 (Bocanegra)!!! El anticuerpo comercial anti-Caspr1 más concentrado marca bien los paranodos.