2023.09.28: ICC co-cultivos diferentes (día 21 – rata 07/09/2023)

Cojo cubres de todas las condiciones para ir viendo cómo va la diferenciación:

• Neuronas médula + Cels Schwann humanas
• Neuronas médula + Cels Schwann rata
• Neuronas médula + C2C12

Protocolo:

• Fijar 20 min con PFA 4%
• 1 lavado con PBS1x
• Bloquear con Goat serum 5% y 0’3% tritón (en PBS): 1h a RT
• Incubar con anticuerpos primarios  y secundarios diluídos en Goat serum 5% (en PBS). Hacer 3 lavados con PBS1x entre cada paso:
  • Neuronas  – cels schwann:
    • S100: ab52642 (abcam). Dil. 1/50 (rabbit) : 2h RT
    • NFh: AB5539 (Merck) Dil. 1/500 (chicken) : 1h RT
    • GAR488 + GAC594 1/500 : 1h RT
  • Neuronas  – C2C12:
    • Desmina: Novocastra.. Dil. 1/50 (mouse) : 2h RT
    • NFh: AB5539 (Merck) Dil. 1/500 (chicken) : 1h RT
    • GAM488 + GAC594 1/500 : 1h RT
• 3 lavados con PBS1x
• Montar con Fluoromount

Resultado:

• Neuronas médula + Cels Schwann humanas: marcan S100 pero no se ve organizado
• Neuronas médula + Cels Schwann rata: marcan S100 pero no se ve organizado
• Neuronas médula + C2C12: hay muy pocas cels C2C12