Muestras:
- C27.1
- C27.2
- C28.1
- C28.2
- C28.3
- C28.4
- C28.5
- C31.1
Protocolo:
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% – 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente).
- Titulación sueros: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300) à Incubar con los sueros 1h
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 45min con anticuerpo secundario: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-620 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | C27.1 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C28.1 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C28.3 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C28.5 1/100 | 1/8100 | 1/900 |
| B blanc | ||||||||||||
| C prot | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 |
| D blanc | ||||||||||||
| E prot | 1/900 | C27.2 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C28.2 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C28.4 1/100 | 1/8100 | 1/900 | C31.1 1/100 | 1/8100 |
| F blanc | ||||||||||||
| G prot | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 | 1/2700 | 1/300 | 1/24300 |
| H blanc | ||||||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 1,097 | 0,224 | 0,056 | 1,035 | 0,139 | 0,493 | 0,246 | 0,127 | 0,096 | 0,189 | 0,103 | 0,373 |
| B blanc | 0,138 | 0,071 | 0,086 | 0,162 | 0,088 | 0,139 | 0,157 | 0,173 | 0,177 | 0,312 | 0,117 | 0,125 |
| C prot | 1,054 | 0,101 | 0,097 | 0,828 | 0,097 | 0,289 | 0,203 | 0,151 | 0,191 | 0,214 | 0,223 | 0,231 |
| D blanc | 0,122 | 0,051 | 0,068 | 0,129 | 0,114 | 0,118 | 0,103 | 0,098 | 0,152 | 0,243 | 0,194 | 0,145 |
| E prot | 0,84 | 0,101 | 0,097 | 0,581 | 0,971 | 0,181 | 0,135 | 0,163 | 0,086 | 0,214 | 1,066 | 0,148 |
| F blanc | 0,066 | 0,094 | 0,064 | 0,093 | 0,123 | 0,103 | 0,072 | 0,149 | 0,13 | 0,184 | 0,21 | 0,151 |
| G prot | 0,426 | 0,08 | 0,084 | 0,304 | 0,709 | 0,115 | 0,115 | 0,228 | 0,145 | 0,201 | 0,81 | 0,114 |
| H blanc | 0,034 | 0,731 | 0,068 | 0,099 | 0,082 | 0,092 | 0,08 | 0,146 | 0,102 | 0,121 | 0,133 | 0,113 |
- C27.1 – 1/8100
- C27.2 – neg
- C28.1- 1/2700
- C28.2- 1/2700
- C28.3 – 1/300
- C28.4 – neg
- C28.5 – neg
- C31.1 – 1/2700
