Muestras:
- 23-322355 (23-2-671): panNF+. Titulación y subclases NF155. Confirmación NF140 y NF186
- 23-325449 (23-2-656): CASPR1+. Titulación y subclases CASPR1
- 23-326657 (23-2-672): CNTN1+. Titulación y subclases CNTN1
Protocolo:
- Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% : 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente)
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Diluir los sueros:
- Titulación: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
- Subclases: diluir sueros 1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1%
- Incubar con los sueros 1h
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Ac secundarios:
- Titulación / screening / confirmación: Incubar con RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1%: 100 ul/pozo, 45 min
- Subclases: Incubar con MAH HRP IgG1 o IgG2 o IgG3 o IgG4 1/1000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100 ul/pozo, 45 min
- Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
- Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) : 100 ul/pozo
- Parar la reacción con 50ul de H2SO4 25%
- Leer a 450-570 nm
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | Cneg | 322355 1/900 | 322355 IgG1 | Cneg | Cneg | Cneg | 325449 1/900 | 325449 IgG1 | Cpos CNTN1 | 326657 1/8100 | 326657 IgG3 | |
| B blanc | Cneg | 322355 1/900 | 322355 IgG1 | Cneg | Cneg | Cneg | 325449 1/900 | 325449 IgG1 | Cpos CNTN1 | 326657 1/8100 | 326657 IgG3 | |
| C prot | Cpos NF155 | 322355 1/2700 | 322355 IgG2 | Cpos NF140 | Cpos NF186 | Cpos CASPR1 | 325449 1/2700 | 325449 IgG2 | 326657 1/300 | 326657 1/24300 | 326657 IgG4 | |
| D blanc | Cpos NF155 | 322355 1/2700 | 322355 IgG2 | Cpos NF140 | Cpos NF186 | Cpos CASPR1 | 325449 1/2700 | 325449 IgG2 | 326657 1/300 | 326657 1/24300 | 326657 IgG4 | |
| E prot | 322355 1/100 | 322355 1/8100 | 322355 IgG3 | 322355 1/100 | 322355 1/100 | 325449 1/100 | 325449 1/8100 | 325449 IgG3 | 326657 1/900 | 326657 IgG1 | ||
| F blanc | 322355 1/100 | 322355 1/8100 | 322355 IgG3 | 322355 1/100 | 322355 1/100 | 325449 1/100 | 325449 1/8100 | 325449 IgG3 | 326657 1/900 | 326657 IgG1 | ||
| G prot | 322355 1/300 | 322355 1/24300 | 322355 IgG4 | 322355 1/300 | 322355 1/300 | 325449 1/300 | 325449 1/24300 | 325449 IgG4 | 326657 1/2700 | 326657 IgG2 | ||
| Hblanc | 322355 1/300 | 322355 1/24300 | 322355 IgG4 | 322355 1/300 | 322355 1/300 | 325449 1/300 | 325449 1/24300 | 325449 IgG4 | 326657 1/2700 | 326657 IgG2 |
NF155 NF140 NF186 CASPR1 CNTN1
Resultado
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A prot | 0,095 | 0,223 | 0,089 | 0,103 | 0,081 | 0,076 | 0,243 | 0,121 | 0,71 | 0,059 | 0,04 | 0 |
| B blanc | 0,128 | 0,077 | 0,086 | 0,099 | 0,086 | 0,122 | 0,09 | 0,07 | 0,193 | 0,085 | 0,043 | 0 |
| C prot | 0,385 | 0,146 | 0,042 | 0,754 | 0,847 | 1,05 | 0,107 | 0,029 | 0,41 | 0,062 | 1,228 | 0 |
| D blanc | 0,088 | 0,072 | 0,029 | 0,086 | 0,077 | 0,092 | 0,094 | 0,029 | 0,098 | 0,046 | 0,102 | 0 |
| E prot | 0,508 | 0,101 | 0,09 | 1,153 | 1,32 | 0,527 | 0,088 | 0,101 | 0,208 | 0,068 | 0 | 0 |
| F blanc | 0,093 | 0,13 | 0,046 | 0,1 | 0,067 | 0,138 | 0,07 | 0,028 | 0,097 | 0,061 | 0 | 0 |
| G prot | 0,331 | 0,092 | 0,653 | 0,984 | 1,135 | 0,395 | 0,054 | 0,149 | 0,099 | 0,032 | 0 | 0 |
| Hblanc | 0,076 | 0,075 | 0,137 | 0,078 | 0,053 | 0,089 | 0,039 | 0,112 | 0,057 | 0,018 | 0 | 0 |
- 23-322355 (23-2-671): Título NF155 1/2700. Subclases: IgG4 >> IgG3. Confirmo positividad de NF140 y NF186. El control positivo de NF155 ha salido demasiado bajo…
- 23-325449 (23-2-656): Título CASPR1 1/900. Subclases: no salen bien.
- 23-326657 (23-2-672): Título CNTN1 1/900. Subclase IgG4
