2023.05.25 – Muestras CNTN1- ELISA titulación CNTN1

Dia previo: coating ELISA CNTN1

CNTN1 protein–> 10383-H08H, Sino biological

[CNTN1]i = 0,25 mg/ml (250 ug/ml)

CNTN1: 12 pozos []f = 1 ug/ml –> 600 ul buffer + 2.4 ul proteina

Muestras:

• C2.1 – 22-2-0854
• C5.1 – 18-656

Protocolo

• Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
• Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente).
• Titulación sueros: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
• Incubar con los sueros 1h
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 45min con anticuerpo secundario: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 100 ul/pozo
• Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
• Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) –> 100 ul/pozo
• Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%

Resultados

C2.1 –> 1/8100

C5.1 –> 1/2700