2023.03.06 Inmunoabsorción LIF en suspensión

• Coating 2 placas de 100mm (Corning) con Poly-D 1/40 en PBS1x (de stock poly-d 1 mg/ml) : 1h a 37ºC (una placa transfectada con LIF y otra con HEKs sin transfectar)
• Coating HEK293: 2,6 millones cels/placa + 8ml de medio
• Preparar mezclas transfección:
  • LIF: una placa de 100mm (superficie 58cm²)
    • 21 ug DNA LIF + 650 ul Optimem
    • 31 ul lipofectamina2000 + 650 ul Optimem
• Juntar y dejar reposar mínimo 5 minutos
• Poner 1,3 ml de mezcla de transfección a la placa

Al día siguiente:

• Permeabilizar  5 min con PBS-tritón 0,3% las dos placas de 100mm plantadas el día anterior (24 horas antes)
• Recoger células con scrapper y poner cels transfectadas en un eppendorf y cels no transfectadas en otro eppendorf (con 200 ul de PBS1x)
• Incubar con suero CIDP15 1/100 overnight a 4ºC en agitación

*Al permeabilizar sin fijar se me han despegado todas las células y al aspirar el tritón las he perdido todas. REPETIR FIJANDO ANTES!!!