2023.02.03- ELISA LIF + IFNL3

Muestras a pasar por LIF y IFNL3:

1. CIDP 78
2. MRVM 2
3. MRTVM 3
4. MRVM 4
5. MRVM 5
6. MRVM 6
7. MRVM 7
8. MRVM 10
9. MRVM 11
10. CIDP 15
11. GDP2
12. GDP3

Muestras a titular LIF y IFN (Titulación: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300) à 5 pozos por titulación à 10 pozos de LIF y 10 pozos de IFNL3

1. CIDP 78
2. CIDP 15

Protocolo:

1. Lavar 3 veces con PBS-tween 0.1%
2. Bloquear con leche 5% en PBS-tween 0’1% – 200 ul pozo (incubar 1h a temp. ambiente).
3. Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%.
4. Diluir los  sueros  1/100 en leche 5% en PBS-tween 0’1% à 100ul por pozo
   • Titulación: preparar un tubo con 400 ul de suero diluído 1/100 en leche 5%, y poner en 5 tubos 280 ul de leche 5%. Pasar 140 ul de dilución del primer tubo al 2º tubo, y así sucesivamente hasta obtener las 6 diluciones (a: 1/100, b:1/300, c:1/900, d: 1/2700, e: 1/8100 i f: 1/24300)
5. Incubar con los sueros 1h
6. Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
7. Incubar 45min con anticuerpo secundario: RAH IgG HRP 1/3000 en leche 5% en PBS-tween 0’1% –> 100 ul/pozo
8. Lavar 3 veces con PBS-tween 0’1%
9. Incubar 5min con TMB: preparar solución un rato antes y tapar de la luz (para que se atempere) à 100 ul/pozo
10. Parar la reacción con 50ul de H₂SO₄ 25%
11. Leer a 450-620 nm

La columna del 1 al 6 es LIF, del 7 al 12 es IFNL3.

Resultados:

• CIDP 15 LIF 1/8100, IFNL3 1/2700

• MRVM LIF 1/900, IFNL3 1/900. Resto de muestras negativas de otros tiempos.