20180705: PBMC isolation (NF155 naive patient)

Mostra: De Haro Mateo, Juan Carlos (NHC: 1768641) –> 6 tubs CPT

Protocol:

  • Extreure 4 – 5 tubs CPT. Centrifugar 20 minuts a 1650 g sense fre a temperatura ambient.
  • Invertir els tubs per resuspendre les cèl·lules al plasma i decantar els sobrenadants a un tub de 50 ml.
  • Rentar amb suero fisiològic en una proporció 1:1 i centrifugar durant 5 minuts a 300g
  • Treure el sobrenedant i fer un altre rentat amb suero fisiològic (posar 40 ml de suero).
  • Centrifugar 5 minuts a 300 g i treure el sobrenedant.
  • Ressuspendre en PBS i fer recompte de cèl·lules –> hi ha 30 milions: es congelen 10 vials de 3 milions (en 1 ml de FBS + 10% de DMSO)

Print Friendly, PDF & Email

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *

This site uses Akismet to reduce spam. Learn how your comment data is processed.