Objectives
To test Zika-GBS patients for IgG positivity towards human NCAM1 in HEK 293 transfected cells.
Patients
| codio laboratorio | COD | GENDER | AGE | DX-COD |
| 1 | ZN001A | 1 | 44 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 27 | ZN002A | 0 | 53 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 6 | ZN003A | 0 | 37 | Encephalitis |
| 5 | ZN004A | 0 | 47 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 11 | ZN005A | 1 | 50 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 57 | ZN006A | 0 | 38 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 21 | ZN007A | 0 | 43 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 18 | ZN008A | 0 | 47 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 15 | ZN010A | 0 | 27 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 4 | ZN011A | 1 | 42 | GUILLAIN BARRÉ SYNDROME |
| 33 | ZN012A | 1 | 22 | Encephalitis |
* como muestra del paciente 11 (ZN005A) se ha usado el suero sobrante de la IP 1/100 en medio de cultivo.
NCAM1 ICC
- Human NCAM1 transfected HEKs 293 grown in coverslips . Fixed with PFA 4% and blocked with 5% goat serum in PBS.
- PBS
- Blocking: 5% goat serum in PBS
- Patient’s sera diluted 1/100 (IgG) with 5% goat serum in PBS.
- Primary Ab: Mouse NCAM 1/40 ( Ref. 347740 BD)
- Secondary Abs: GAM499(1/500) +GAH 594 (1/500) IgG
- Vectashield mounting medium
** Nota: como en la comprobación de transfección de NCAM1 se ha visto un marcaje muy intenso, se decide hacer una prueba con cél HEK transfectadas con CNTN2 para ver si las HEKs expresan constitutivamente NCAM1. La ICC en estas cél se hará con comercial de NCAM1 y su correspondiente secundario GAM488.
RESULTS
Si bien algunos más que otros, los pacientes aparentan marcar NCAM1 en la membrana. Como el marcaje del anticuerpo comercial es muy intenso, en parte debido a que las HEKs expresan constitutivamente NCAM1 aun sin estar transfectadas, se sospecha que el marcaje visto en los pacientes puede deberse a un cruce de canal. Para confirmar si el marcaje es o no específico, repetiremos esta ICC sin anticuero comercial.
Editado 20170704: al omitir el anticuerpo comercial (experimento 20170703) , ninguna de las muestras presenta el más mínimo marcaje IgG contra NCAM1. Se deduce que el marcaje visto para estas mismas muestras se debe entonces a un cruce de canal con el anticuerpo comercial. En futuros experimentos se testarán todas las muestras usando el anticuerpo comercial de NCAM1 considerablemente más diluido, en vez de la 1/40 usaremos la 1/500.
