Se analizan por neuronas motoras de rata por IgG e IgM algunas de las muestras de neuropatías paraneoplásicas del Hospital Clínic.
Pacientes
IgG
- D2) 08-530
- D3) 00-1248
- D4) 90-92
- D5) 04-726
- D6) 92-38
- E1) 98-164
- E2) 03-838
- E3) 05-409
- E4) 04-1323
- E5) 16-3512
- E6) 01-203
- F1) 93-94
- F2) 97-506
- F3) 02-616
- IRB 15-467
- AMC 15-107
IgM
- A1) 95-43
- A2)94-292
- A3) 97-543
- A4) 93-40
- A5) 92-147
- A6) 94-55
- B1) 93-38
- B2) 92-133
- B3) 01-848
- B4) 00-1289
- B5) 98-14
- B6) 03-1167
- C1) 04-2
- C2) 13-1127
- C3) 15-2420
- C4) 15-1131
- C5) 11-1167
- C6) 00-307
- D1) 15-2373
- D2) 08-530
PROTOCOLO
PRIMARIO:
- Sacar 300ul de medio del propio cultivo y añadirle 2ul (IgG) o 7,5 (IgM) de suero del paciente en cada uno de los pocillos de placa de 12 donde haremos la inmuno. Mezclar bien con pipeta procurando no hacer espuma y colocar el cubre en el fondo del pocillo de una placa de 12 pocillos vigilando que quede bien cubierto. Incubar 1h a 37ºC (estufa).
FIJADO:
- Vaciar el pocillo lavar una vez con PBS 1X. Fijar con PFA comercial al 4% (aprox 300ul de PFA/pocillo) 5 min a temperatura ambiente.
- Eliminar el PFA y lavar una vez con PBS 1X.
SEGUNDARIO:
- Eliminar el PBS y añadir 300 mcL de el secundario GAH 488 IgG (caja 25) o GAH 488 IgM (caja 21) 1:1500 en Goat serum al 5%. Incubar 1h a temperatura ambiente.
- Lavar cada cubre con H2O y montarlo sobre un porta con Vectashield.
RESULTADOS
Todas las muestras son negativas excepto las mencionadas a continuación:
IgG
- AMC 15-107 ++
IgM
- B3) 01-848 +
- B4) 00-1289 ++
