Muestras:
- IgG 136-8 1/10 – doble panNF
- Suero 136-8 1/100 – doble panNF
- IgG 23-2-656 1/10 – doble panNF
- Suero 23-2-656 1/100 – doble panNF
- IgG 23-2-374 – doble CASPR1
- Suero CNTN1+ – doble CASPR1
Protocolo: (entre cada paso hacer 3 lavados con PBS1x)
- Fijar con acetona (-20ºC) 10 min
- Separar los dos grupos de tejido con Dakopen
- Bloquear 1h RT con Goat serum 5% + 0’1% tritón
- Incubar con suero/IgG diluído en Goat serum 5% + 0’1% tritón (según diluciones anteriores) 1h RT
- Incubar con ac comercial diluídos en Goat serum 5% + 0’1% tritón 1h RT
- anti-panNF 1/200
- anti-CASPR1 ab133634 1/20
- Incubar con ac secundarios diluídos 1/500 en Goat serum 5% + 0’1% tritón 1h RT
- 1-4) GAH594 IgG + GAC488
- 5-6) GAH594 IgG + GAR488
- Montar con Fluoromount
Resultado: se ven muy bien los paranodos con todas las muestras, incluso con la muestra 22-2-374 (Bocanegra)!!! El anticuerpo comercial anti-Caspr1 más concentrado marca bien los paranodos.